Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

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Referent: Prof. Dr. med. U. Walter Korreferent: Priv.-Doz. Dr. med. J. Bauersachs Dekan: Prof. Dr. med. S. Silbernagl Tag der mündlichen Prüfung: 04.05.2004 Der Promovend ist Arzt.
Inhaltsverzeichnis 1. Einleitung 1 1.1 Aktivierung von Thrombozyten 2 1.1.1 Aktivierung durch membranständige Proteine 2 1.1.2 Aktivierung durch lösliche Agonisten 3 1.2 Auslösung einer Aggregation 4 1.3 Hemmung von Thrombozyten 5 1.4 Regulation von Plättcheninhibierung und -aktivierung 7 1.5 ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten 8 1.5.1 P2X1 8 1.5.2 P2Y1 9 1.5.3 P2Yac/12 9 1.6 Pharmakologische Beeinflußbarkeit der Aktivierung von Thrombozyten 9 1.7 Herleitung der Fragestellung/Zielsetzung 10 2. Materialien 12 2.1 Bakterien 12 2.1.1 Bakterienstämme 12 2.1.2 Medien und Agarplatten für Bakterien 12 2.1.3 Zusätze für Medien und Agarplatten 12 2.2 Kulturzellen für Transfektions-Experimente 12 2.2.1 COS-7–Zelllinie (ECACC 87021302) 12 2.2.2 Humane Astrocytoma Zellline 1321N1 (ECACC 86030402) 12 2.3 Vektoren und Plasmide 13 2.4 Oligonukleotid-Primer 13 2.5 Chemikalien und Lösungen 15 2.6 Enzyme 15 2.7 Größenstandards 16 2.8 Kits 16 2.9 Antikörper und Antiseren 17 2.10 Verbrauchsmaterialien 17 2.11 Geräte 18
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Seite 7 und 8: 4.3.5 Verlauf der ADP-induzierten C
Seite 9 und 10: 4.9 Expression in zellulären Syste
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Seite 13 und 14: 1.1.2 Aktivierung durch lösliche A
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Seite 17 und 18: Phosphorylierung von VASP zumindest
Seite 19 und 20: schnellen Kalzium-Einstrom, vermitt
Seite 21 und 22: vermitteln: Die bereits molekular i
Seite 23 und 24: 2.3 Vektoren und Plasmide Vektor Re
Seite 25 und 26: 2.5 Chemikalien und Lösungen Adren
Seite 27 und 28: 2.9 Antikörper und Antiseren Bezei
Seite 29 und 30: PCR-Gerät (Gene Amp PCR System 240
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Seite 33 und 34: freien Kalziums im Zytosol gemessen
Seite 35 und 36: Als Trenngel wird in allen Fällen
Seite 37 und 38: inkubiert, anschließend fünfmal j
Seite 39 und 40: 3.8.3. Präparation größerer Meng
Seite 41 und 42: cDNA-Ansatz wird nur bei erfolgreic
Seite 43 und 44: mit Insert erscheinen weiß) verfü
Seite 45 und 46: Zellen auf sterilisierten Deckgläs
Seite 47 und 48: (Version 1.0, Becton Dickinson). In
Seite 49 und 50: Anmerkung: Das HBS:Ca wurde erst am
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dem für den jeweiligen Probanden s
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4.2.3 Synergistische Effekte von AD
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4.3.3 Normaler Verlauf einer ADP-in
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Sowohl in der Ticlopidin-Studie als
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fmol [cAMP] 30 20 10 0 Abb. 13: Rep
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1 2 3 4 Abb. 16: Westernblot mit de
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4.5.3.2 Verhalten der VASP-Phosphor
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Funktion des getaggten Proteins bee
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4.7.1.4 pCMV-P2X1-N-Flag Beschreibu
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BamH I und Xho I geschnittenen Vekt
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4.7.5 Zusammenfassung Plasmid Vekto
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allerdings auf einem niedrigeren Ni
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97 67 57 45 40 27 1 2 3 4 5 6 Abb.
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Kombination von Permeabilisierung/N
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Mittels der nativen COS-7 Zellen wu
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Dabei ergab sich folgendes Bild: 1
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Mit ADP oder ATP lassen sich keine
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340 nm 10 s 60 s 100 s 160 s 190 s
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Zusammenfassend ergab sich folgende
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4.10.5 Versuche zur Regulation des
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gemessen werden, die in ihrer Grö
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5. Diskussion 5.1 Studiendesign Das
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auch andere bei Patienten mit Ather
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Blockade der Bindungsstelle für da
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Aufgrund des zum ASS divergenten Wi
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anderen Zellininen eine sehr einfac
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5.9.2 Stabile Expression Stabile Ze
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Rezeptordichte (wie z.B. überexpri
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die auch mit transient exprimierten
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7. Abkürzungen und Maßeinheiten 1
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SNP Sodium nitroprusside (Natrium N
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16. Caen, J.P., A.T. Nurden, C. Jea
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46. Garcia, A., A.B. Galler, U. Wal
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77. Klages, B., U. Brandt, M.I. Sim
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110. Paul, B.Z., J.L. Daniel, and S
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141. Shattil, S.J. 1999. Signaling
Seite 125 und 126:
Danksagung Die vorliegende Arbeit e
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