Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

3.8 Methoden Molekularbiologie 28
3.8.1 Zentrifugation 28
3.8.2 Präparation kleinerer Mengen Plasmid-DNA für Klonierungen und
Sequenzierungen 28
3.8.3 Präparation größerer Mengen Plasmid-DNA für Transfektionen
3.8.4 DNA-Konzentrationsbestimmung durch Messung der optischen
29
Dichte (OD) 29
3.8.5 Horizontale Agarosegel-Elektrophorese zum Auftrennen von
DNA-Fragmenten 29
3.8.6 Aufreinigung von DNA aus Agarosegelen mit dem QIAquick Gel
Extraction Kit 29
3.8.7 Aufreinigung von PCR-Produkten mit dem QIAquick PCR Purification Kit 30
3.8.8 RNA-Isolierung aus humanen Thrombozyten mit TRIZOL 30
3.8.9 RNA-Isolierung aus Astrocytoma 1321 N1 Zellen mit TRIZOL
3.8.10 Reverse Transkription – cDNA-Herstellung mit Hilfe des ProSTAR
30
First-Strand RT-PCR Kit 30
3.8.11 Amplifikation von DNA-Fragmenten durch die Polymerase-Ketten-
Reaktion (PCR) 31
3.8.12 Verdau von PCR-Fragmenten oder Plasmid-DNA mit
Restriktionsendonukleasen 31
3.8.12.1 Präparative Spaltungen 31
3.8.12.2 Analytische Spaltungen 32
3.8.13 Ligation von DNA-Fragmenten 32
3.8.14 Transformation kompetenter E.coli Zellen 32
3.8.15 Verifizierung der Plasmide mit Insert 32
3.8.16 Plasmid-Sequenzierung 33
3.8.17 In-Vitro-Protein-Synthese mit dem TNT Quick Coupled Transcription /
Translation System 34
3.9 Methoden Zellkultur 34
3.9.1 Kulturbedingungen 34
3.9.2 COS-7 – Zellen (ECACC 87021302) 34
3.9.3 Humane Astrocytoma Zellline 1321N1 (ECACC 86030402) 34
3.9.4 Passagieren adhärenter Zellen 34
3.9.5 Einfrieren und Auftauen von Zellen 35