Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

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Quarzküvetten (Hellma) Aggregationsröhrchen (7,25 x 55 mm, silikonisiert, Biodata) Polypropylensäulen (leer, 1 ml, QIAGEN) Sterilfilter (Ultra-Clear 5x41 mm, Beckman) Kryoröhrchen (Nunc) Gel Blotting Papier (Schleicher & Schuell) S/W-Negativ Film (Tri-X PAN 400, Kodak) Farb-Dia Film (Elitechrom 400, Kodak) RIA Röhrchen (Polystyrol Röhrchen 12x75 mm, Greiner) Szintillationsgefäß (6 ml Pony-Vials, Packard Liquid Scintillation Analyzer, Canberra-Packard Bioscience) Aggregationsröhrchen (Test Tubes, silikonisiert, 7,25x55mm, BIO/DATA) 2.11 Geräte Zentrifugen (Sigma 3K-1, Eppendorf Centrifuge 5415 C und 5417 R, Hettich Roto Silenta/K) Wasserbad (E12, Haake) Thermomixer (Eppendorf Thermomixer 5436) Heizblock (test tube heater stuart scientific, Heinse + Ziller) Elektrophoresekammer für Polyacrylamidgele (Anfertigung Fa. Noras, Würzburg) Elektrophoresekammer für Agarosegele (GNA-100, Amersham Pharmacia Biotech) Feinwaagen (Analytic LC 4800 P und Analytic AC 120 S, Satorius) Geltrockner (Drygel Sr. Modell SE 1160, Hofer Scientific intruments) Spannungsgeber (Anfertigung Fa.H.Hölzl, München und Standard Power Pack P25 Biometra) Blot-Kammer (Trans Blot Cell, BioRad) Schüttler (Rocking Platform, Biometra) Schüttler (DELFIA Plateshake 1296-003, PerkinElmer) Schüttelinkubatoren (Certomat H bzw. BS-1, Braun Biotech International) Entwickler (X-OMAT M 35, Kodak) pH-Meter (PHM 92 LAB, Radiometer Kopenhagen) Vortex Genie 2 TM (Ben<strong>der</strong> & Hobein) Durchflusszytometer (FACSCalibur, Becton Dickinson) Gamma-counter (LB 2104, Berthold) Fluoreszenzspektrometer (Luminescence Spectrometer LS 50, PerkinElmer) Mikroskop Zellkultur (Axiovert 25, Zeiss) Fluoreszenzmikroskop (Aristoplan Epifluoreszenz-Mikroskop, Leitz) 18
PCR-Gerät (Gene Amp PCR System 2400, Perkin Elmer) Photometer (Ultrospec 2000, Amersham Pharmacia Biotech) ABI PRISM TM 310 Genetic Analyzer (Perkin Elmer) Szintillationszähler (Packard Liquid Scintillation Analyzer, Canberra-Packard Bioscience) Brutschrank Bakterien (Haereus) Brutschrank Zellkultur (Modell 3336, Labotect GmbH) Kalzium-Einzel-Zell-Meßplatz: Fluoreszenzmikroskop (Diaphot, Nikon) Xenonlampe (Xenophot HLX, Osram) CCD-Kamera (Theta-Systems) Auswertungsprogramm (FUCAL, Till Photonics) 19
Seite 1 und 2: Aus dem Institut für Klinische Bio
Seite 3 und 4: Inhaltsverzeichnis 1. Einleitung 1
Seite 5 und 6: 3.8 Methoden Molekularbiologie 28 3
Seite 7 und 8: 4.3.5 Verlauf der ADP-induzierten C
Seite 9 und 10: 4.9 Expression in zellulären Syste
Seite 11 und 12: 1. Einleitung Thrombozyten sind mit
Seite 13 und 14: 1.1.2 Aktivierung durch lösliche A
Seite 15 und 16: Thrombozyten dieser Tiere aggregier
Seite 17 und 18: Phosphorylierung von VASP zumindest
Seite 19 und 20: schnellen Kalzium-Einstrom, vermitt
Seite 21 und 22: vermitteln: Die bereits molekular i
Seite 23 und 24: 2.3 Vektoren und Plasmide Vektor Re
Seite 25 und 26: 2.5 Chemikalien und Lösungen Adren
Seite 27: 2.9 Antikörper und Antiseren Bezei
Seite 31 und 32: 3.2 Thrombozytenpräparation aus Vo
Seite 33 und 34: freien Kalziums im Zytosol gemessen
Seite 35 und 36: Als Trenngel wird in allen Fällen
Seite 37 und 38: inkubiert, anschließend fünfmal j
Seite 39 und 40: 3.8.3. Präparation größerer Meng
Seite 41 und 42: cDNA-Ansatz wird nur bei erfolgreic
Seite 43 und 44: mit Insert erscheinen weiß) verfü
Seite 45 und 46: Zellen auf sterilisierten Deckgläs
Seite 47 und 48: (Version 1.0, Becton Dickinson). In
Seite 49 und 50: Anmerkung: Das HBS:Ca wurde erst am
Seite 51 und 52: Zeitplan: CLOPIDOGREL 1 2 3 4 5 6 7
Seite 53 und 54: dem für den jeweiligen Probanden s
Seite 55 und 56: 4.2.3 Synergistische Effekte von AD
Seite 57 und 58: 4.3.3 Normaler Verlauf einer ADP-in
Seite 59 und 60: Sowohl in der Ticlopidin-Studie als
Seite 61 und 62: fmol [cAMP] 30 20 10 0 Abb. 13: Rep
Seite 63 und 64: 1 2 3 4 Abb. 16: Westernblot mit de
Seite 65 und 66: 4.5.3.2 Verhalten der VASP-Phosphor
Seite 67 und 68: Funktion des getaggten Proteins bee
Seite 69 und 70: 4.7.1.4 pCMV-P2X1-N-Flag Beschreibu
Seite 71 und 72: BamH I und Xho I geschnittenen Vekt
Seite 73 und 74: 4.7.5 Zusammenfassung Plasmid Vekto
Seite 75 und 76: allerdings auf einem niedrigeren Ni
Seite 77 und 78: 97 67 57 45 40 27 1 2 3 4 5 6 Abb.
Seite 79 und 80:
Kombination von Permeabilisierung/N
Seite 81 und 82:
Mittels der nativen COS-7 Zellen wu
Seite 83 und 84:
Dabei ergab sich folgendes Bild: 1
Seite 85 und 86:
Mit ADP oder ATP lassen sich keine
Seite 87 und 88:
340 nm 10 s 60 s 100 s 160 s 190 s
Seite 89 und 90:
Zusammenfassend ergab sich folgende
Seite 91 und 92:
4.10.5 Versuche zur Regulation des
Seite 93 und 94:
gemessen werden, die in ihrer Grö
Seite 95 und 96:
5. Diskussion 5.1 Studiendesign Das
Seite 97 und 98:
auch andere bei Patienten mit Ather
Seite 99 und 100:
Blockade der Bindungsstelle für da
Seite 101 und 102:
Aufgrund des zum ASS divergenten Wi
Seite 103 und 104:
anderen Zellininen eine sehr einfac
Seite 105 und 106:
5.9.2 Stabile Expression Stabile Ze
Seite 107 und 108:
Rezeptordichte (wie z.B. überexpri
Seite 109 und 110:
die auch mit transient exprimierten
Seite 111 und 112:
7. Abkürzungen und Maßeinheiten 1
Seite 113 und 114:
SNP Sodium nitroprusside (Natrium N
Seite 115 und 116:
16. Caen, J.P., A.T. Nurden, C. Jea
Seite 117 und 118:
46. Garcia, A., A.B. Galler, U. Wal
Seite 119 und 120:
77. Klages, B., U. Brandt, M.I. Sim
Seite 121 und 122:
110. Paul, B.Z., J.L. Daniel, and S
Seite 123 und 124:
141. Shattil, S.J. 1999. Signaling
Seite 125 und 126:
Danksagung Die vorliegende Arbeit e
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