Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten
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Abb. 24: Vektorkarte des pcDNA3 sowie die Sequenz <strong>der</strong> Multiple Cloning Site (MCS) (71).<br />
4.7.2.1 pcDNA3-P2Y1-HA-N<br />
Beschreibung: Das Plasmid exprimiert den P2Y1-Rezeptor mit einem N-terminalen HA-Tag. Für die<br />
Klonierung in das Plasmid pcDNA3 wurden die Schnittstellen BamH I und Xho I gewählt, die beide<br />
nicht in <strong>der</strong> cDNA von P2Y1 enthalten sind.<br />
Konstruktion: Zur Herstellung des Plasmids wurde die P2Y1-cDNA mit den Primern GIK 158, <strong>der</strong><br />
eine BamH I-Schnittstelle, eine nach Kozak (80) optimierte Sequenz sowie die für den HA-Tag<br />
kodierende Sequenz enhält, und GIK 155, <strong>der</strong> eine Xho I-Schnittstelle enthält, mittels PCR<br />
amplifiziert. Das PCR-Produkt wurde mit BamH I und Xho I geschnitten und in den ebenfalls mit<br />
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