Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

Mit ADP oder ATP lassen sich keine Kalzium-Signale aus den Zellen ableiten. Dies wurde in
vielfachen Vor-Versuchen demonstriert. Damit kann die aus der Literatur bekannte Abstinenz von
purinergen Rezeptoren auf dieser Zelllinie bestätigt werden (40).
Ein deutlich positives Kalzium-Signal konnte dagegen regelmäßig nach Stimulation der Zellen mit
Thrombin (0,5 U) gemessen werden und diente bei Ausbleiben eines Agonisten-induzierten
Kalzium-Signals als Positiv-Kontrolle.
4.10.2 Astrozytoma 1321N1 Zelllinie mit stabil exprimierenden P2Y1-VSV-C -Rezeptoren
Zunächst wurde getestet, ob die den Rezeptor P2Y1-VSV-C stabil exprimierenden Zellen nach
Stimulation mit ADP oder ATP eine Kalzium-Antwort liefern.
ratio (340/380)
5000
4000
3000
2000
1000
0
0 50 100
t [s]
150 200
Abb. 34: Kalzium-Einzelzell-Meßergebnisse
an der Zelllinie Astrozytoma 1321 N1 mit
stabil exprimierenden P2Y1-VSV-C –
Rezeptoren. Zugabe von 5 µM ADP nach
45 s, 5 µM ATP nach 140 s. Jede Kurve mit
unterschiedlichem Symbol repräsentiert das
Kalziumsignal einer einzelnen Zelle.
ADP in einer Konzentration von 5 µM zeigte den erwarteten Kalzium-Anstieg in den Zellen.
Überraschenderweise zeigte auch ATP in einer Konzentration von 5 µM ein deutliches Kalzium-
Signal. Damit zeigt sich hier bereits eine erste Auffälligkeit in der Pharmakologie des P2Y1-
Rezeptors, und zwar in Abhängigkeit von der exprimierenden Zelle: In Thrombozyten kann nämlich
durch ATP keine Kalzium-Freisetzung bewirkt werden, während in Astrocytoma-Zellen eine
regelmäßige Kalzium-Antwort erfolgt.
Die variable Höhe des gemessenen Signals ist nicht auf eine unterschiedliche Expression der
Rezeptoren in den Zellen zurückzuführen, da mittels nachfolgender Immunfluoreszenz-Kontrollen
der vermessenen Zellen nachgewiesen werden konnte, daß alle Zellen identische
Expressionsmuster zeigen, wie ja von einer stabil exprimierenden Zelllinie nach klonaler Expansion
gefordert wird. Die dennoch auftretende Varianz ist somit auf eine unterschiedliche Beladung der
Zellen mit Fura-2 zurückzuführen, was durch unterschiedliche Fluoreszenzsignale der mit Fura-2
beladenen Zellen bestätigt werden konnte.
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