Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cereviszae Expresión constitutiva. Activación en glucosa (G+) si 1-YPGE < 2-YPD. Represión en glucosa (G-) si 1-YPGE > 2-YPD . Activación en nitrógeno (N+) si 4-YNBgIu > 5-Privación de nitrógeno. Represión en nitrógeno (N-) si 4-YNBgIu < 5-Privación de nitrógeno. Activación en fase estacionaria (S+) si 3-YPDestacionario > 1-YPGE 0 2-YPD. Activación durante el choque osmótico (O+) si 6-choque osmótico > 4-YNBgIu. Activación por choque térmico (H+) si 8-YNBgIu 37°C > 7-YNBgIu 23°C. Si la variación de expresión entre las condiciones consideradas anteriormente podía cuantificarse al menos por un factor 2, se consideraba que una ORF estaba regulada. De esta forma pudimos proceder a una clasificación de las ORFs en función de su regulación (Tabla 4.11.). Numerosas ORFs mostraron estar reguladas ya que sólo e137,2 % de las ORFs cuantificadas mostraron una expresión constitutiva. Sin embargo hay que tener en cuenta que el umbral fijado para considerar una ORF como regulada es relativamente bajo y que muchas respuestas fisiológicas están mediadas por variaciones transcripcionales mayores. La mayoría de estas ORFs reguladas (45,9%) lo hicieron en respuesta sólo a una de las diferentes condiciones de cultivo, mientras que 14 de ellas (16,1 %) lo hicieron frente a dos o tres. 144 • • • •
• RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 4.11. Clasificación de las 103 ORFs analizadas en los cromosomas VII y XIV de S. cerevisiae en función de su regulación (G+/-: activación o represión en glucosa; N+/-: activación o represión en nitrógeno; S+: activación durante la fase estacionaria; O+: activación por choque osmótico; H+: activación por choque térmico). NC: No Cuantificada; C: Constitutiva. ^ ORF ^ ^ Regúláción ORF^ ^ Régulaĉión . ^ORF ^ ^ ^Reĝulación ORF Regŭlaĉión ^ . ^ ^ . G2850 NC G3505 C N1696 C N1872 NC .. kh t ^.}^zc. ^ +itL+[M t .i uX. ^tutq.^ i.} : ti ^.¢^y. ^.^ ^y.^.,^ ^. , y,r,? ^ . . r ^ ., k ^, d G'K i r' ^a ^R, !5.> ^ \^``^1 ! l. i ^r ^.-^. a ^J^ ti^ dy^ ^i 1 3` " ^y ^ ^ ,,z } a . ^ 1 ^ ^ LS ! ^ ^. ^T. 285}6 ti^.. ^,..;. 14^'. iC..,^ ^^i}tE^,Y'.^ •i ^351,7^ ^i^ ^ i ^!?`^-^..^°^ ^^^ Ñ1706. ^ ^,.^^.^sCt ,N^: b U._ ^ >N187Ŝ ^ .Y.:}^eR...z. ; , ^ C ^' .^.5+, ^ ^,^^-^ ^, G2861 G G3535 NC N1710 G+O+ N1879 C -,* ^ ... .:__ t G2882 a . y 4 f_.S `ri ^^ }.k\.^„ ^, c A^-fX ^ . . ^ ^ {! ^l^ `` F ^ ` ^ a^, "^Y^`^ N . R .;y. Y ftk ^.,. l 1..,3 ^;.- 9b k -^F_^. "' j ! ^ Y ,^ iq :r^ ` k.Y" 4 >.G^ 5. ^.^aC 3 s ti f-7 .t'? . ^,.k.^^;:^N+Ff^ :^^^^ y ;G3540, ^s^ Y^.,,^NC 3;^, .^,^^^ :^,. ^^ .N171-4 ..^^ ^ ^,r ^..r.. G .± r^^.^^ .1\11882, 1^^ ^. ^ rp+,, Y. .,M` t. çs f4...Ŝn^.^. ° ^^^{.^^^ 'N1727 , ^ y ,^, ^-^ ^w , ^ S+.ár {4^^`^^^ G; ^^^ . r.. 3•.ht.. i. ,.t 9.t. tN 189,7 ^ ^^^G=^0^±,4 n^^^^ ^ .:1 r t'.. ^.q. ,..{ a G2916 G+H+ G3719 NC N1735 NC N1913 G+ -fuir U'.,. G3,0.8,0 y`1 . . . ^ 2^S y ^Svl }i^+ F Y4, t 1:1J4 Y - J ^F`w i1i. Y`^^ ,i "H'J^ y( ^^ll ^ C 11 Yc).. T M j^ -fft R^ ^r4. !hTi'^ 1 ! { ^ V:T.r^^^L TM'^"Y^ ^ C ^ ^^^ Sti^}^, ^C.,,M^^^.s: :G3759 ^^N^ ,^,S+K:^,^.^^, N1739, .^',:Y^^rC,r:^^^^^ , Ñ1,9`17 ^Y^F1 ^.irT ^ ' . . - ♦sn ^^f t^7 +'.Y `. .;C ^:t•^ :' ,F^, . .c ,^^^,í^..: G3090 G- G4332 C N1743 NC N1925 G+N+H+ r• w ^N aA ^^h ^,tl .^' l A 4yy , U0. _ Vk'.+Qr SŜ Kt! F ^ ti 3^F h 3 yvlT ^ ^..^ T. ,i ^- 1 F -^. wG ^•. :G3•107. , ^ t ^ íti ^ `^ ^^. t t xF, ;^,^y;,^^s ^^^^ ^G7538 r . > .,... . . ,^_ ^1r^^4 ^=.,;t^G-! t ^^,t=^ _^^^`` : ^ 'N^1747 .. . < < ^ , }}='F^`nsC`^`^^` < h.^.., ., z V::..l ^^ ^ N1^929 ^, ^ ^N ^^,^r =: r st a } .^r . ^^ ^; G3110 C G7553 C N1751 G+ N1954 G+H+ y 'r: +. - tt 1 F ^ . . n^ , , • ^ f r ^ -^t' i- ^ s _ rr`r ^ c t t a 2- ^? r ' , a ' G^3..^1,'13 ` 3.,^,r.^ ^^ ,^f ^t1^G+ 1^i..r^.. °, `^ ^^ ^, ^7584^ .,. 17^95 , J•^^ t J-^ ; NC ^^ t ° S3< 1^12215 ^ ^,^ } . F^jp ^ ,F l :.,...c: ti ^^ dr G^+-°' , ^ ^u^^ ^ } Y G3406 NC G7826 NC N1825 G+N-H+ N2219 O+ ;..) _ ), . ? iS^J? Y^%.kl. f -.. ^ k^` 1 7 c. ' .,J'+4 4 y ^ .. ^ L` 1 Pr,i • • x"^.^C. -^l `} `r a'• Jl p? ^ 7Y ^ ,,} Lu37. 4' \ y^ _ 3+ Y : ^. , ^ ^r . ^ •> ^ ^!1:- W -, ^i.^ 7 ^ ^..T^{.C } ^ ^i^+ ^ 2 1^- J .^ d .• G343^ r,^^^^^ ^ x^C^,^^^,^.^^ YG8523 ^^^^;;^Ĝ-N : ^^.._... w.. f^^ ^^ t1^1843 ^^^;,,^^ C^^ . ^..:^.. v^^ ^^^ ^ =N2227^ r.^Y^ú^ro^^^^;^ ^:^ G3435 NC G8530 C N1847 G N2231 G+ `r r a ^^„ny^aa,7rt +.r,^ ! S l^.iF.'\l Y^ ^4^^í^ t ^ 34^4 ^..7^^^^ Y^^,^ N• r7-^ eb^ Cs ,G8537 t 4^. w+' ^^y,.3p-,-^^^ _ _ . ^ . +f ,. ŝ t^^e^{ SX^r^^^^^ , ^ ^^,^^ ,^^ l^^, ^,^ Jt k i^T i xt-ŝ>:i- °^ tt^=c.`,*. c2 ^ . .,! }4k?^.^C?.. ^ h^^.^;+•.z.r..: ^^870 { :^ Ct ^^ r^ .^.+si'„ iat, n • s,^.,.5,......, F -.. . ^.r.a-.... ^^^; G.+. r^ „^ .^,^. -. ^ . ..^:: r 1\ 23:^2r i ^rs^:,.^.^ La expresión de numerosas ORFs parece estar influenciada por la presencia de glucosa (44,2 %); el nivel de expresión del 32,6 % de las ORFs aumentó después del cambio de las células a un medio con glucosa. Sólo el 10.8% sufrió una represión por glucosa (Tabla 4.12.). 145