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Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S cerevisiae
4.2. Verificación del método de análisis con sondas de re^ulación
conocida:
Antes de analizar la expresión de las ORFs de función desconocida se
verificó el método de análisis a fin de comprobar su correcta respuesta
respecto a varios genes de regulación conocida. Los Northerns blots se
realizaron según se ha descrito en Materiales y Métodos. La preparación de
las sondas de hibridación se realizó mediante PCR, usando cebadores (Tabla
3.3.} y DNA moldes cuyas características fueron descritas en Materiales y
Métodos.
Los resultados de los cálculos de los niveles de expresión relativo y
absoluto (posteriores a la corrección con el rRNA 25S} correspondientes a las
hibridaciones con las sondas control (Figura 4.1.) se recopilan en la Tabla 4.3.
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Tabla 4.3. Valores de Nivel Relativo (N.R.) y Absoluto (N.A.)
correspondientes a las hibridaciones de los RNAs extraídos en diferentes
condiciones de cultivo: 1-YPGE, 2-YPD, 3-YPD/fase estacionaria, 4-
YNBgIu/privación de aminoácidos, 5-YNBgIu/privación de nitrógeno, 6-
YNBgIulchoque osmótico, 7-YNBgIu/23°C, 8-YNBgIu/36°C, con sondas
de regulación conocida. (A.E.: Actividad específica de las sondas x106
cpmlµg de DNA).
GEN
RpL25
A.E.
^^^ 1^88'6`
1648
HSPI Z 1251
1^353`
NIVELES RELATIVOS (%)
1 2 3 4 5 6 7
--,
^1:00.:
64 100 12 19 15 30 45
95
4
:1U0:
64 98 95 7
26
:;1:(
100
>,:.-^. .
N.A.
3,20
2,61
•
•
•
•