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Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cerevisiae Las electroforesis en geles de agarosa al 2% se llevaron a cabo durante 60 minutos a 70V y los geles se tiñeron en una disolución de bromuro de etidio (Sµg/ml) (Figura 3.5.1.) los geles de poliacrilamida al 6%, de mayor resolución en la separación electroforética de fragmentos pequeños, se tiñeron con nitrato de plata; la tinción se hizo bañando el gel durante media hora en una solución de ácido acético al 0,1 % y de etanol al 10 %, se ^ lavó con agua, se dejó de nuevo 30 minutos en una solución de tinción con nitrato de plata (0,2 g de N03Ag en 200 ml de agua) y, después de lavarlo otra vez en agua, se sumergió en la solución de revelado (3 g de NaOH, 200 ml de agua, 1 ml de formaldehido al 37%) unos 10 minutos hasta la aparición de las bandas teñidas. Finalmente se lavó el gel con agua y se secó al vacío sobre un papel de filtro (Figura 3.5.2.). En algunos casos, los fragmentos de DNA que se iban a utilizar como sondas se rescataron del gel utilizando el Kit de Gene Clean BIO-101 siguiendo el protocolo indicado por los vendedores. El proceso se basa en disolver la agarosa con una disolución de ioduro sódico a 55°C y añadir una matriz de sílice, denominada "glassmilk", a la que se adhiere el DNA a 0°C. Tras un proceso de lavados sucesivos con una disolución de cloruro sódico, etanol y agua, el DNA se eluye (con tampón 1 xTE o agua bidestilada) de la matriz incubando a 55°C. ^ ss • • • •
MATERIALES Y MÉTODOS MV 1 2* 3 4 5* MV MV 6* 7* 8 MV 9 10 MV 11 12 MV MV 13* 14 15 16 17 18 19 20 21* MV 22 23 24 25* 26 MV MV 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 MV 38 39 40 42 42 43 44* 45 46* 47 48 49 50 51 52* MV ,.^: ^ : ^: ^^ ..^:
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