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Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cerevisiae
de no dar información sobre el tamaño y níunero de transcritos, se
adapta a estudios a gran escala, por el menor coste y la rapidez de la
información obtenida. Además es compatible con el estudio de la
regulación de transcritos abundantes (Mager et al., 1998) pero se
comprobó que no tenía sensibilidad suficiente para ser aplicable a
las ORFs analizadas en este estudio debido a que son de baja
expresión. .
La técnica elegida en este trabajo, a pesar de ser pesada y costosa para
estudios a gran escala, fue la del Northern blot porque, además de investigar
la funcionalidad de las ORFs desconocidas, también es importante determinar
el tamaño real de cada transcrito con el fin de comprobar si el tamaño de la
secuencia de la ORF estudiada se adecua al de su transcrito y, de este modo
confirmar la ausencia de errores durante el proyecto de secuenciación del
genoma de la levadura. ^
Para asignar rigurosamente cada transcrito a su respectiva ORF y
minimizar las fluctuaciones en la precisión de la señal obtenida, se emplearon
como sondas, productos de PCR de tamaño uniforme (alrededor de 300pb)
amplificados con cebadores específicos de cada una de las 103 ORFs
estudiadas.
Se estudió la expresión de las 103 ORFs en distintas condiciones de
cultivo, ya que el estudio de su regulación podía aportar algunos datos sobre
la función de las proteínas desconocidas.
En una primera fase se estudiaron las 52 ORFs del cromosoma XIV en
tres condiciones de cultivo: medio rico con glucosa o etanoUglicerol (YPD y
YPGE respectivamente) y medio mínimo (YNB) recogiendo las células en la
so
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