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Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cerevisiae
3.2.1.2. Crecimiento de bacterias:
Para seleccionar las bacterias que habían sido transformadas con un
plásmido que contiene el gen de resistencia a la ampicilina, se utilizó el medio
LB (Luria-Bertani) suplementado con el antibiótico (Sambrook et al., 1989).
Su composición es:
• Triptona bacteriológica 1 %
• Extracto de levadura 0,5%
• Cloruro sódico 0,5%
• D-glucosa 0,1 % ^
Una vez esterilizada la solución, cuando su temperatura alcanzaba los
60°C se añadía el antibiótico a una concentración de 40-80 µg/ml. Para la
conservación de las bacterias en medio sólido se añadió a la solúción 1,5% de
agar bacteriológico y se vertió en placas Petri.
3.2.2. Condiciones de cultivo:
En las 11 condiciones de estudio utilizadas se partió de pre-cultivos en
fase de crecimiento exponencial. Con ellos se inocularon los correspondientes
medios de cultivo (1:200) y cuando en estos se alcanzó una Aóoo = 0,8 (3x10^
células/ml), se centrifugaron los medios de cultivo en botellas de 125 ml a
5.000 rpm y a 4°C durante 5 min. El sedimento celular se mantuvo en frío
para evitar la degradación del RNA.
Las diferentes condiciones de cultivo se establecieron como se indica a
continuación. Se cultivaron las células FY73 en YPGE a 30°C hasta que
^00=0,8 y se recogieron mediante centrifugación. La tercera parte de las
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