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MATERIALES Y MÉTODOS
de pixels (de diferentes intensidades y abarcando un rango de 0 a 10700) de
imagen digital; se suele trabajar con un tamaño de pixel de 200 µm.
La cuantificación y el estudio de las señales de hibridación se hace
gracias a un programa informático llamado Image QuaNT ^M Permite realzar
la imagen ajustando el rango de análisis a los 256 niveles de grises y colores
de la pantalla (elimina las altas intensidades de pixel inutilizadas y las bajas
intensidades que aumentan el fondo contaminante). Además usando una de
sus opciones (Peak Finder) se puede calcular la intensidad de las señales a lo
largo de un área trazada en la imagen y que contiene la(s) señal(es).
Para poder distinguir correctamente los picos de la línea base (la cual
representa el ruido de fondo) se necesita antes de realizar el análisis
predeterminar una serie de parámetros: .
Ruído de fondo: permite destacar los picos correspondientes a
señales de hibridación por encima del fondo contaminante. Su valor
por defecto está comprendido entre 0,01 y 0,05, pero en caso de
señales intensas (por ejemplo en la rehibridación con rRNA25S) se
puede aumentar hasta un 1,00.
Sensibilidad: toma valores comprendidos entre 0,03125 y 256
(niveles de grises y colores de la pantalla). Cuando hay muchos
picos (señal débil o membrana insuficientemente lavada) se fija un
valor de sensibilidad bajo (0,5 a 1) y se aumenta (hasta 8) cuando
hay pocos picos sobresalientes.
Kernel: se ^jó a un valor de 20 que permitía excluir los picos
estrechos y de escasa intensidad.
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