lie^x - RUC

Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cerevisiae
conocida: 250, ,125, 63, 32, 16, 8 y 4 ng/µl. Estos patrones se prepararon
diluyendo en forma seriada el marcador V de Boehringer Manheim.
Después de 20 minutos, cuando el gel había absorbido todas las gotas, ^
se visualizó el DNA en el transilurninador de rayos UV, se tomó una
fotogra^a y se estimó la concentración de cada producto de PCR comparando
la intensidad de los productos resultantes de la PCR con la de los estándares.
3.6. Reacciones de hibridación:
3.6.1. Marcaje de las sondas:
Se realizó por el método de marcaje "random primed" (cebadores
aleatorios) (Feinberg y Vogelstein, 1983) utilizando los reactivos
suministrados en el kit Prime-a-Gene®Labelling System de Promega.
La mezcla de reacción contiene:
300 µl de tampón Sx (Tris-HC1 250mM pH 8,0, MgC12 25 mM,
DTT 10 mM, HEPES^1^ 1M pH 6,6, 26 unidades de A260/ml de
hexadesoxirriborlucleótidos aleatorios),
20 µl de dCTP (1,5 mM), 20 µl de dGTP (1,5 mM) y 20 µl de dTTP
(1,5 mM),
60 µl de seroalbumina bovina ( 10 mg/ml).
(1) Ácido (4-(2-Hidroxietil)-1 piperazina-etano-sulfónico
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