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3.4. Northern blot 42
3.4.1. El gel de agarosa 42
3.4.2. Las muestras de RNA 42
3.4.3. La electroforesis 42
3.4.4. La transferencia 43
3.5. Obtención de sondas por PCR 44
3.5.1. Diseño de los cebadores 44
3.5.2. El DNA molde utilizado ^ 51
3.5.3. La reacción en cadena de la polimerasa ^ 55
3.5.4. Análisis de los productos de PCR 57
3.6. Reacciones de hibridación 62
3.6.1. Marcaje de las sondas 62
3.6.2. Separación y cuantificación de la incorporación de
isótopo 64
3.6.3. Reacciones de hibridación y lavado 65
3.7. Cuantificación de las señales de hibridación 66
3.7.1. Nivel relativo 68
3.7.2. Nivel absoluto 69
3.8. Búsqueda de características deducidas de las secuencias de DNA 70
3.8.1. Determinación del uso de codones 70
3.8.2. Estudio de los promotores de las ORFs 71
3.8.3. Otras características deducidas de las secuencias 72.
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
4.1. Selección de las condiciones de análisis
4.2. Verificación del método de análisis con sondas de
regulación conocida
4.3. Análisis mediante Northern blot de la expresión de las
ORFs objeto de estudio
4.4. Niveles absolutos de expresión 119
4.4.1. Clasificación de las ORFs en función de su nivel
absoluto 119
4.4.1.1. ORFs cuya expresión no fue detectada 123
75
77
82
87
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•
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