lie^x - RUC

Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cerevisiae
Las electroforesis en geles de agarosa al 2% se llevaron a cabo
durante 60 minutos a 70V y los geles se tiñeron en una disolución de
bromuro de etidio (Sµg/ml) (Figura 3.5.1.)
los geles de poliacrilamida al 6%, de mayor resolución en la
separación electroforética de fragmentos pequeños, se tiñeron con
nitrato de plata; la tinción se hizo bañando el gel durante media hora
en una solución de ácido acético al 0,1 % y de etanol al 10 %, se ^
lavó con agua, se dejó de nuevo 30 minutos en una solución de
tinción con nitrato de plata (0,2 g de N03Ag en 200 ml de agua) y,
después de lavarlo otra vez en agua, se sumergió en la solución de
revelado (3 g de NaOH, 200 ml de agua, 1 ml de formaldehido al
37%) unos 10 minutos hasta la aparición de las bandas teñidas.
Finalmente se lavó el gel con agua y se secó al vacío sobre un papel
de filtro (Figura 3.5.2.).
En algunos casos, los fragmentos de DNA que se iban a utilizar como
sondas se rescataron del gel utilizando el Kit de Gene Clean BIO-101
siguiendo el protocolo indicado por los vendedores. El proceso se basa en
disolver la agarosa con una disolución de ioduro sódico a 55°C y añadir una
matriz de sílice, denominada "glassmilk", a la que se adhiere el DNA a 0°C.
Tras un proceso de lavados sucesivos con una disolución de cloruro sódico,
etanol y agua, el DNA se eluye (con tampón 1 xTE o agua bidestilada) de la
matriz incubando a 55°C. ^
ss
•
•
•
•