lie^x - RUC

Análisis de la expresibn de 103 ORFs de función desconocida en S cerevisiae
Después de retirar la solución de lavado, las membranas se introdujeron
en una bolsa de plástico para poder exponerlas 48 horas a la pantalla del
Phosphorlmager (ver apartado 3.7.).
3.7. Cuantificación de las señales de hibridación:
Para analizar las señales radioactivas de hibridación sobre la membrana
de nylon se usa un escaner (Phosphorlmager Scanning Instrument ^ 425 de
Molecular Dynamics). El fundamento de este sistema se describe a
continuación.
El dispositivo posee una pantalla compuesta de cristales de BaFBr:Eu+2
que tienen la facultad de sufrir reacciones redox al ser excitados por
radiaciones de alta energía (emitidas en este caso por el fósforo .radioactivo) y
según su estado de oxidación, emitir o absorber energía de diferente longitud
de onda. Durante la exposición de la muestra a la pantalla de fósforo el Eu+2
es oxidado a Eu+3 y el BaFBr reducido a BaFBr ". .
A1 escanear la pantalla de fósforo con un láser de Neón-Helio que emite
una luz roja a una longitud de onda de 633 nm, el BaFBr " absorbe la energía
del láser provocando la liberación de sus electrones; BaFBr - es oxidado y
Eu+3, captando estos electrones, se reduce a Eu+2. Esta nueva reacción redox
vá a producir una liberación de energía a una longitud de onda diferente (luz
azul) y proporcional a la radioactividad que estaba presente en la muestra.
Esta energía es recolectada y posteriormente medida y procesada por un
ordenador conectado al escaner. El procesamiento consiste en relacionar las
unidades de radioactividad (cpm) de cada señal de hibridación con un número
66
•
•
•