lie^x - RUC

Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S cerevisiae
• pUC-PCK fue construido amplificando, por PCR, la región
codificadora de PCKI , y tras introducirle sitios XbaI en ambos
extremos, se clonó en el plásmido pUC 18 (amablemente cedido
por A. Brown, University of Aberdeen, Escocia)
• yCPlaclll-rpL25 que contiene el fragmento SacUEcoRI (0,3
Kb) de rpL25 fue amablemente cedido por R. Planta ( Vrije
Universiteit, Amsterdam, Holanda)
• pUC19-HSP12 donde está insertado el fragmento EcoRI (0,6 Kb)
de HSP12 fue también facilitado por R. Planta (Vrije Universiteit,
Amsterdam, Holanda)
• pYcARG4 con el fragmento EcoRUC1aI (1,0 Kb) de ARG4 fue
proporcionado por F. Messenguy (Institut de Recherches du
CERIA, Bruselas, Bélgica).
La amplificación por PCR del control correspondiente al gen CAR1 se
hizo, como para las ORFs del cromosoma VII, a partir de DNA genómico.
Para amplificar las ORFs correspondientes al cromosoma XIV de
S. cerevisiae se utilizaron cósmidos generados en el proyecto de
secuenciación. Estos fragmentos comprenden regiones del cromosoma XIV
que se solapan entre sí de manera que abarcan la totalidad de su material
genético (784 Kb). Los cósmidos necesarios fueron amablemente cedidos por
el coordinador del proyecto de secuenciación del cromosoma XIV (P.
Philippsen, Biocentrum, Basel, Suiza). Una representación esquemática nos
permite situar, en el cromosoma XIV cada cósmido utilizado (Figura 3.2.).
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