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Análisis de la expresión de 103 ORFs de función desconocida en S. cerevisiae
^s
La hibridación in situ (Schul et al., 1996) es un método de detección
citoinmunoquímica de ^la expresión génica a través de hibridaciones
con sondas marcadas de células previamente fijadas. Este método da
una información directa y precisa de la transcripción génica, sin
embargo no es adecuado para estudios a gran escala y no informa
sobre el tamaño y número de transcritos.
La cartografia mediante PCR, PCR-mapping (Crauwels et al.,
1997), que consiste en amplificar extractos de mRNA por RT-PCR
(Reverse Transcriptase-PCR) y estudiar la expresión génica
mediante la separación del cDNA obtenido en un gel; permite
detectar incluso los genes de muy baja expresión y proporciona
información sobre el tamaño del transcrito.
Las fusiones a GFP (Green Fluorescent Protein) consisten en
introducir el gen GFP, que codifica una proteína fluorescente, en el
locus del gen estudiado y cuantificar la producción de GFP mediante
citometría de flujo (Niedenthal et al., 1996). Es un método ventajoso
porque permite el estudio de la expresión génica in vivo y
proporciona datos sobre la localización subcelular de la proteína
estudiada. Pese a todo, no informa sobre el tamaño y número de
transcritos.
El método de Hybridisation array (Fodor et al., 1993, Shena et al.,
1995; Hoheisel, 1997) permite, a partir de mRNA, sintetizar cDNA
para marcarlo e hibridarlo con oligonucleótidos específicos, de las
ORFs que se quieren estudiar, fíjados a una plantilla o panel (array).
Esta técnica permite la elaboración rápida de mapas
transcripcionales, pero al inicio del proyecto EUROFAN I no estaba
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