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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
optimizada para levadura y además no proporciona información
sobre la integridad y el tamaño de los transcritos. Recientemente
esta técnica se ha aplicado al análisis del "transcriptoma" de
levadura (De Risi et al., 1997; Wodicka et al., 1997) y se está
convirtiendo en una herramienta potente y efectiva en el estudio
funcional de transcriptomas a grari escala.
El método SAGE (Serial Analysis of Gene Expression) consiste en
sintetizar cDNA a partir de una extracción de RNA de células en
diferentes condiciones de cultivo. Este cDNA es digerido
específicamente en fragmentos (Tags) de unos 10 pb específicos de
los transcritos. Los Tags son ligados posteriormente entre sí, y la
hebra de DNA así obtenida es finalmente secuenciada (Velculescu
et al., 1995). La secuenciación del DNA proporciona el número real.
de transcritos para cada ORF estudiada. Este método fue aplicado a
la totalidad del genoma de S. cerevisiae (Velculescu et al., 1997) y
se pudo así obtener datos en cuanto a la expresión de 4.665 genes
(76%) de los 6.121 que predice el análisis de la secuencia total del
genoma de levadura. Esta técnica permitió detectar la expresión de
ORFs de tamaño inferior a 100pb no consideradas inicialmente
como genes reales pero, por otro lado, no tiene suficiente
sensibilidad para detectar los transcritos de ORFs de muy baja
expresión (inferior a 0,3 transcritos por célula). Además no
proporciona información sobre el tamaño de los transcritos.
La técnica de Dot/Slot-blot (Kafatos et al., 1979) consiste en
depositar gotas (dots) o líneas (slots) de extractos totales de mRNA
sobre una membrana de nylon o de nitrocelulosa para
posteriormente hibridarlas con sondas específicas marcadas. A pesar
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