Juin 2005

UNIVERSITE HENRI POINCARE, NANCY 1FACULTE DES SCIENCESSUJET D'EXAMENDIPLOME DEUG SV2Epreuve de cours spectroscopie moléculaireapplicationsaux protéinesSession de Juin 2005DateHoraireDurée du sujet 1 heureNom des rédacteurs C. CorbierF. FavierDocuments autorisésX Documents non autorisésX Calculatrices autoriséesCalculatrices non autoriséesPartie 1 : Emission de fluorescence et dichroïsme circulaire (C, Corbier, sur20 points, durée conseillée: 40 min)Question A)Quels types d'informations peut apporter l'étude des spectres d'émission de fluorescence desrésidus Tryptophane dans les protéines? (10 lignes maximum).Question B)Une protéine P renferme 1 résidu tryptophane et 5 résidus tyrosine. La figure 1 présente lesspectres d'émission de fluorescence de la protéine en présence (courbe b) ou en l'absence(courbe a) d'un ligand se fixant à proximité du Tryptophane après excitation à 295 nm- Question BI Expliquer pourquoi la longueur d'onde d'excitation choisie pour lesspectres présentés en figure 1 est de 295 nm.- Question B2. Que reflèteraient des spectres obtenus après excitation à 280 nm ?- Question B3 Comment la polarité du milieu environnant le tryptophane est-ellemodifiée par la présence du ligand?Question C)Dans les expériences suivantes réalisées sur la protéine en présence ou en absence de cemême ligand, on ajoute un agent de "quenching", l'acrylamide, à concentration variable. Onmesure la fluorescence résiduelle et on détermine la constante de Stern-Volmer (K,»)- Question CI Rappeler en quelques lignes le principe de cette expérience et lasignification de cette constante- Qnestion C2 Analyser ces résultats. bKsvTableau 1 : constantes de Stern-Volmerobtenues en absence ou en présence de ligand.a