Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...
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94 Material <strong>und</strong> Methoden<br />
aP Assay chymo Assay<br />
4MUP CII<br />
BP360±10 BP380±10<br />
ST400 ST400<br />
LP400 LP400<br />
LP440 LP440<br />
BP445±8.6 BP459±44<br />
Tabelle 3.3: Filter, die für den alkalische Phosphatase bzw. den Chymotrypsin-Assay<br />
verwendet wurden. BP gibt einen Bandpass mit dem spezifizierten TransmissionsbereichinNanometernan.<br />
LPstehtfür einen Langpass <strong>und</strong> ST für einen Strahlteiler, der<br />
Licht mit Wellenlängen unterhalb <strong>von</strong> 400 nm reflektiert <strong>und</strong> Licht mit längeren Wellenlängen<br />
transmittiert. Hersteller der Filter: BP360, ST400, LP400 aus Filterblock A<br />
(Leitz, Fluoreszenzmikroskopie, Deutschland), BP380: AF03, BP445: AF12, BP459:<br />
A459 (Amko, Deutschland), LP440: LS440 (Corion, USA).<br />
teiler wird das Licht in das Mikroskopobjektiv eingekoppelt. Aus dem verwendeten<br />
20-fach Mikroskopobjektiv (20x/NA 0,5 (Linos, Deutschland) ergibt sich ein<br />
Anregungsspot mit einem maximalen Durchmesser <strong>von</strong> 1.25 mm. Das <strong>von</strong> der<br />
Probe ausgehende Fluoreszenzlicht wird <strong>durch</strong> den Strahlteiler, einen Langpaß<br />
<strong>und</strong> eine Sammellinse über Umlenkspiegel auf den Photomultiplier kollimiert.<br />
Ein zusätzlicher Bandpaß sorgt für eine Unterdrückung der Eigenfluoreszenzen<br />
der Optiken. Die Detektionsblende befindet sich wie die Anregungsblende in<br />
der Bildebene des Objektivs. In der folgenden Tabelle sind die Filter, die für<br />
den alkalische Phosphatase bzw. den α-Chymotrypsin Assay eingesetzt wurden<br />
aufgelistet.<br />
3.4.2 Optimierter Aufbau zur Handhabung <strong>von</strong><br />
Nanoliterproben<br />
Der gesamte Aufbau zum Erstellen, Bestrahlen <strong>und</strong> Auswerten der Proben ist<br />
schematisch in Abbildung 3.29 dargestellt.
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