Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

188 Diskussion
nicht grundsätzlich anders verhalten als ungebundene Enzyme.
Der Einfluß der kovalenten Bindungen an die Mikropartikel auf die Enzymstabilität
wurden im Gegensatz zum Einfluß der Goldkonjugation experimentell untersucht,
da die Experimente an den Mikrometerpartikeln in Hinblick auf die
thermischen Mikroeffekte besonders wichtig sind. Der Vergleich der Denaturierung
von Enzym Mikropartikelkonjugaten mit der Denaturierung von gelöstem
Enzym in Wasserbadtemperatursprungexperimenten hat keine signifikanten Unterschiede
ergeben. Sowohl alkalische Phosphatase als auch α-Chymotrypsin werden
durch die kovalente Koppelung nicht um mehr 5◦C, d.h. im Rahmen der
Meßgenauigkeit der Enzymaktivität in ihrer Inaktivierungstemperatur bei 10 s
Temperatursprüngen bzw. 100 s Temperatursprüngen verändert.
Für α-Chymotrypsin wurde der Einfluß einer kovalenten Modifizierung von einer
Aminogruppe des Proteins auf die thermische Stabilität im Detail von Mozhaev
untersucht [131]. Entscheidend für die Veränderung der Thermostabilität ist
dabei die Ladung der Seitenkette des Moleküles, mit der α-Chymotrypsin gekoppelt
wird, da über die Ladungen der Gruppen die Hydrophobizität der Proteine
verändert werden kann. Eine Erhöhung der Hydrophobizität führt zu einer
Stabilisierung unter physiologischen Bedingungen, da sich die Proteine gegen
einen höheren Zusammenhalt entfalten müssen. Für die genutzte Konjugation
ohne zusätzliche Ladungen an einer hydrophilen Oberfläche erwartet man nach
Mozhaev keine grundlegende Veränderung der thermischen Denaturierungskinetik.
6.1.2 Temperaturen an Mikroabsorbern
Die Temperatur, die an den Partikeloberflächen ohne Blasenbildung mindestens
erreicht wird, ist für die Interpretation der Ergebnisse entscheidend. Diese Mindesttemperatur
kann über den äußeren Druck beeinflußt werden. Eine Berechnung
der Temperatur war nicht mit der nötigen Präzision möglich, da die physikalischen
Parameter der Partikel nicht ausreichend genau bekannt waren. Einen
Aufschluß über die erreichten Mindesttemperaturen erhält man jedoch über die
Blasenbildung.
Für die Magnetit beladenen Polystyren-Absorber kann nach der Temperaturabschätzung
von einer Temperatur im Bereich von 100◦C ausgegangen werden,