Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

106 Material und Methoden
A
B
C
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
15nm
80nm
Abbildung 3.39: Farbumschlag von Rot nach Blau nach der Aggregation von unzureichend
beschichteten Goldpartikeln in Proben, in denen die Proteinkonzentration
von 1 nach 12 abnimmt.
Zu Goldkolloiden wurde in abnehmender Konzentration Protein zugegeben, das
nahe am isoelektrischen Punkt der Proteine an das Gold bindet. Ist zu wenig
Protein in der Lösung, so können die Konjugate nicht vollständig bedeckt werden,
so dass sie nach wie vor gegenüber starken Ionen empfindlich bleiben. D. h. durch
Zugabe von Salzlösung kommt es zu einer Aggregation und damit zu einem Farbumschlag
ins Blaue. Ist zu viel Protein in der Lösung, so kommt es zu einer
schwächeren Bindung, da mehr Protein auf die Oberfläche bindet und so eine
kleinere Wechselwirkung zwischen dem einzelnen Protein und der Partikeloberfläche
möglich ist. Dies ist schematisch in Abbildung 3.40 dargestellt und führt
vor allem zu einer verminderten Langzeitstabilität der Konjugate.
kleine Protein Konzentration
starke Bindung
große Protein Konzentration
schwache Bindung
Abbildung 3.40: Schematische Darstellung der nicht kovalenten Bindung von Proteinen
an Gold in Abhängigkeit von der Proteinkonzentration.
Die Konjugation wurde sowohl für alkalische Phosphatase -Konjugate als auch