Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

Ergebnisse 135
Restaktivität [%]
120
100
80
60
40
20
0
aP-ns
1 J/cm²
chymo-ns
1 J/cm²
aP-ps
10 mJ/cm²
chymo-ps
10 mJ/cm²
aP-ps
50 mJ/cm²
chymo-ps
50 mJ/cm²
Abbildung 4.12: Restaktivität von alkalische Phosphatase und von α-Chymotrypsin
nach Bestrahlung mit einem Nanosekundenpuls (16 ns; 532 nm) und 104 ps-Pulsen
(35 ps; 527 nm). Der stärkste Aktivitätsverlust trat mit 20% nach Bestrahlung von
alkalischer Phosphatase mit 104 Pulsen und 50 mJ/cm2 auf.
4.4 Bestrahlung der Mikrometerkonjugate
Bei der Bestrahlung der Mikrometerpartikel-Enzymkonjugate wurde die Inaktivierung
der Enzyme in Abhängigkeit von der Bestrahlung, der Pulszahl und dem
Zusatz von hitzdenaturiertem Protein als Pufferzusatz untersucht. Die Experimente
wurden zum Teil unter erhöhtem Druck durchgeführt. Durch den erhöhten
Druck kann eine höhere Temperatur auf der Partikeloberfläche ohne Blasenbildung
erreicht werden. Die Pulszahlabhängigkeit wurde gemessen, um eine Additivität
der Inaktivierung zu untersuchen. Da es ein Ziel der Untersuchungen
war, einen proteininhärenten irreversiblen Prozeß beobachten zu können, der unabhängig
von der Umgebung der Proteine ist, wurden die Untersuchungen erst an
Proben durchgeführt, ohne dem Puffer zerkochte Proteine zuzusetzten, die mit
den Enzymen aggregieren können. Um den Einfluß der Aggregation mit anderen
Proteinen auf die Inaktivierung zu demonstrieren, wurden anschließend einige
Messungen mit zugesetztem hochkonzentriertem denaturiertem Protein im Probenpuffer
durchgeführt. Die Erwartung war, dass entfaltete Proteinketten mit