Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

116 Material und Methoden 3.7 Wasserbadexperimente Die Experimente zur Charakterisierung der thermischen Denaturierung von alkalischer Phosphatase, aP-PM-Konjugaten, aP-SM-Konjugaten und chymo-SM- Konjugaten im Zeitbereich 1 bis 100 s mit Temperaturen bis zu 100◦C wurden mit Wasserbad-Temperatursprung-Experimenten durchgeführt. Als Behälter für die zu untersuchenden Proteine wurden für den Zeitbereich 1 bis 10 s Markröhrchen aus Quartz (Hilgenberg, Deutschland) genutzt. Für den Zeitbereich 10 bis 100 s wurden einfache 1.5 ml PP-Reaktionsgefäße (Eppendorf, Deutschland) genutzt. Die Markröhrchen haben einen Durchmesser im genutzten Bereich von 300 µm und eine Wandstärke von 10 µm. Die Röhrchen wurden am Wasserbadende mit einem temperaturstabilen Wachs verschlossen. Die Proben wurden für einen Temperatursprung einer gewünschten Zeit in das geheizte Wasserbad getaucht. Um den Temperatursprung zu beenden, wurden die Proben in ein Eisbad gebracht. Mit den Markröhrchen wurde eine Erwärmung der Proben auf 99 % der Solltemperatur nach einer Temperaturrechnung innerhalb von 100 ms durch Wärmeleitung erreicht. Im Fall der Kunstoffröhrchen betrug die mit einem Thermofühler gemessene Heiz- bzw. Abkühlzeit 5 s. 3.8 Zellexperimente Erste Versuche zur selektiven Inaktivierung von Zellen durch Laserbestrahlung von Goldpartiekln wurden an Suspensionszellen durchgeführt, um ein einfaches Umsetzen der Zellen zwischen den verschiedenen Versuchsschritten zu ermöglichen. Die Zelllinie sollte folgende Eigenschaften besitzten: 1. Die Zellen sollten einen hochspezifischen Zellmarker besitzen, der von einer ähnlichen Zelllinie nicht exprimiert wird. 2. Die Zellen durften keine phagozytierenden Zellen sein, damit die Konjugate so wenig wie möglich unspezifisch aufgenommen werden würden. 3. Die Zellen und deren Zellmarker sollte nach Möglichkeit eine medizinische Relevanz haben.
Material und Methoden 117 Als diese Kriterien erfüllende Zelllinie wurde die Hodgkin Lymphom Zelllinie L428 gewählt. Diese ist in der Zelldatenbank DSMZ- Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH beschrieben [48]. L428 trägt als spezifisches Oberflächenantigen CD30. CD30-Expression ist für die Bestimmung von primären kutanen und nodalen T-Zell-Lymphomen klinisch relevant [40]. Als CD30 negative Kontrollzelllinie wurde die Zelllinie U937 gewählt, die ebenfalls in der Datenbank beschrieben ist. Die Zelllinien lassen sich neben CD30 durch die Differenzierungsmarker CD13 und CD16 unterscheiden. In Vorversuchen wurde die CD30 Expression einer nicht synchronisierten Zellpopulation quantifiziert. Dafür wurde der gegen CD30 gerichtete Antikörper BerH2 (anti- CD30) gewählt. Dieser wurde mit einem Alexa-488-Farbstoff-markierten Ziegeanti-Maus-Antikörper auf den Zellen durchflusszytometrisch nachgewiesen. Die Ergebnisse sind in Abbildung 3.44 dargestellt.
Seite 1 und 2:
Aus der Medizinischen Laserzentrum
Seite 3 und 4:
Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung 1 2
Seite 5 und 6:
4.4 Bestrahlung der Mikrometerkonju
Seite 7 und 8:
Kapitel 1 Einleitung Laser ermögli
Seite 9 und 10:
Einleitung 3 und Bestrahlungszeit i
Seite 11 und 12:
Einleitung 5 Schädigungszeit [s] 1
Seite 13 und 14:
Einleitung 7 Der experimentelle Ans
Seite 15 und 16:
Kapitel 2 Theorie 2.1 Struktur und
Seite 17 und 18:
Theorie 11 im grünen Spektralberei
Seite 19 und 20:
Theorie 13 den Zustand minimaler En
Seite 21 und 22:
Theorie 15 Wirkungsquantum. Setzt m
Seite 23 und 24:
Theorie 17 Entfaltung bei 100°C En
Seite 25 und 26:
Theorie 19 heiten auf, die für ein
Seite 27 und 28:
Theorie 21 wird besonders an dem Be
Seite 29 und 30:
Theorie 23 Es wurden die Enzyme alk
Seite 31 und 32:
Theorie 25 a) Abbildung 2.5: Strukt
Seite 33 und 34:
Theorie 27 p [bar] 1000 100 10 1 0.
Seite 35 und 36:
Theorie 29 Experimentell wurde er z
Seite 37 und 38:
Theorie 31 Diesem Druck steht die T
Seite 39 und 40:
Theorie 33 denkbaren Quellterm δ(r
Seite 41 und 42:
Theorie 35 T = 0. Die Kugel mit dem
Seite 43 und 44:
Theorie 37 Greenfkt. [K m²/J²] .
Seite 45 und 46:
Theorie 39 Glas mit Gold purpurrot
Seite 47 und 48:
Theorie 41 527 nm den komplexen Bre
Seite 49 und 50:
Theorie 43 Absorption [willk. Einh.
Seite 51 und 52:
Theorie 45 Streuprozesse [69] kühl
Seite 53 und 54:
Theorie 47 �T [K/(mJcm²)] 100 1
Seite 55 und 56:
Theorie 49 2.5.2 Magnetit-Mikroabso
Seite 57 und 58:
Theorie 51 in. Ein bekanntes Beispi
Seite 59 und 60:
Kapitel 3 Material und Methoden 3.1
Seite 61 und 62:
Material und Methoden 55 Fluoreszen
Seite 63 und 64:
Material und Methoden 57 Diodensign
Seite 65 und 66:
Material und Methoden 59 Farbstoff
Seite 67 und 68:
Material und Methoden 61 Schwankung
Seite 69 und 70:
Material und Methoden 63 Die Puls-z
Seite 71 und 72: Material und Methoden 65 Pulsenergi
Seite 73 und 74: Material und Methoden 67 a) b) Inte
Seite 75 und 76: Material und Methoden 69 3.2.2 Raum
Seite 77 und 78: Material und Methoden 71 Bestrahlun
Seite 79 und 80: Material und Methoden 73 breite des
Seite 81 und 82: Material und Methoden 75 normierte
Seite 83 und 84: Material und Methoden 77 Glas Laser
Seite 85 und 86: Material und Methoden 79 angefahren
Seite 87 und 88: Material und Methoden 81 3.4 Aufbau
Seite 89 und 90: Material und Methoden 83 durch eine
Seite 91 und 92: Material und Methoden 85 500µm Abb
Seite 93 und 94: Material und Methoden 87 kommt es d
Seite 95 und 96: Material und Methoden 89 Abbildung
Seite 97 und 98: Material und Methoden 91 vorhandene
Seite 99 und 100: Material und Methoden 93 PMT Bandpa
Seite 101 und 102: Material und Methoden 95 C Klima ka
Seite 103 und 104: Material und Methoden 97 abnehmen.
Seite 105 und 106: Material und Methoden 99 angepasst
Seite 107 und 108: Material und Methoden 101 Druckkamm
Seite 109 und 110: Material und Methoden 103 Neben dem
Seite 111 und 112: Material und Methoden 105 geführt.
Seite 113 und 114: Material und Methoden 107 für α-C
Seite 115 und 116: Material und Methoden 109 BerH2-Au
Seite 117 und 118: Material und Methoden 111 Chymo-Au-
Seite 119 und 120: Material und Methoden 113 kraft auf
Seite 121: Material und Methoden 115 durch ein
Seite 125 und 126: Material und Methoden 119 der Zelle
Seite 127 und 128: Kapitel 4 Ergebnisse 4.1 Absorber-F
Seite 129 und 130: Ergebnisse 123 0,6 µs 1,6 µs 2,0
Seite 131 und 132: Ergebnisse 125 Bestrahlung mit 15
Seite 133 und 134: Ergebnisse 127 30 µm 15 nm-BSA-Gol
Seite 135 und 136: Ergebnisse 129 50nm Abbildung 4.7:
Seite 137 und 138: Ergebnisse 131 die Denaturierungsra
Seite 139 und 140: Ergebnisse 133 chymo-SM-Konjugate D
Seite 141 und 142: Ergebnisse 135 Restaktivität [%] 1
Seite 145 und 146: Ergebnisse 139 der Pulsenergie wurd
Seite 151 und 152: Ergebnisse 145 Die Aktivität der K
Seite 153 und 154: Ergebnisse 147 Pikosekundenlaser l
Seite 157 und 158: Ergebnisse 151 4.5.4 Diffusion der
Seite 159 und 160: Ergebnisse 153 Zellmembran in keine
Seite 161 und 162: Ergebnisse 155 perimente wurden min
Seite 163 und 164: Ergebnisse 157 4.6.3 ZelluläreEffe
Seite 165 und 166: Ergebnisse 159 a) Abbildung 4.31: A
Seite 167 und 168: Ergebnisse 161 hängigkeit von der
Seite 169 und 170: Ergebnisse 163 Anteil lebender Zell
Seite 171 und 172: Ergebnisse 165 Diese Regionen stell
Seite 173 und 174:
Kapitel 5 Modellierung der Schäden
Seite 175 und 176:
Schadensmodellierung 169 Material Q
Seite 177 und 178:
Schadensmodellierung 171 5.1.2 Temp
Seite 179 und 180:
Schadensmodellierung 173 zu erwarte
Seite 181 und 182:
Schadensmodellierung 175 T [K/(mJ/c
Seite 183 und 184:
Schadensmodellierung 177 Auf diese
Seite 185 und 186:
Schadensmodellierung 179 Fällen er
Seite 187 und 188:
Schadensmodellierung 181 in der ges
Seite 189 und 190:
Schadensmodellierung 183 5.2.2 Bere
Seite 191 und 192:
Kapitel 6 Diskussion 6.1 Thermische
Seite 193 und 194:
Diskussion 187 6.1.1 Einfluß der P
Seite 195 und 196:
Diskussion 189 da sich innerhalb de
Seite 197 und 198:
Diskussion 191 Blasenbildungsschwel
Seite 199 und 200:
Diskussion 193 bis zum spinoidalen
Seite 201 und 202:
Diskussion 195 obachteten Raten. Di
Seite 203 und 204:
Diskussion 197 schmelzen. Elektrone
Seite 205 und 206:
Diskussion 199 erwartet. Hierdurch
Seite 207 und 208:
Diskussion 201 dazu wurde erst bei
Seite 209 und 210:
Diskussion 203 labilen Aminosäuren
Seite 211 und 212:
Diskussion 205 nicht wieder zu eine
Seite 213 und 214:
Diskussion 207 mamembran am reduzie
Seite 215 und 216:
Kapitel 7 Ausblick Zu den Schwerpun
Seite 217 und 218:
Ausblick 211 Inaktivierungskinetik
Seite 219 und 220:
Ausblick 213 d.h. in der Beschichtu
Seite 221 und 222:
Ausblick 215 nem Tag zu kultivieren
Seite 223 und 224:
Kapitel 8 Zusammenfassung In der La
Seite 225 und 226:
Zusammenfassung 219 Goldpartikel wi
Seite 227 und 228:
Literaturverzeichnis [1] P. Adkins.
Seite 229 und 230:
Literaturverzeichnis 223 [22] C. Bo
Seite 231 und 232:
Literaturverzeichnis 225 [43] K. Di
Seite 233 und 234:
Literaturverzeichnis 227 [67] Z. Gr
Seite 235 und 236:
Literaturverzeichnis 229 [91] P. Ka
Seite 237 und 238:
Literaturverzeichnis 231 [114] C. P
Seite 239 und 240:
Literaturverzeichnis 233 [136] B. N
Seite 241 und 242:
Literaturverzeichnis 235 [159] J. R
Seite 243 und 244:
Literaturverzeichnis 237 [181] SPSS
Seite 245 und 246:
Literaturverzeichnis 239 [206] P. Z
Seite 247:
Danksagung 241 Ich danke Herrn Prof
Alle anzeigen

Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?