Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

86 Material und Methoden
in diesem Volumenbereich für die genutzten Puffer (PBS) wurde ausgeschlossen,
indem in 5 ml Proben ein Teil des Wasser verdampft und nach der Abkühlung der
pH-Wert des Puffers bestimmt wurde. Dieser war vor und nach Verdampfen des
Puffers bis zu einem Volumen von 20% gleich. Die beobachtete Teilverdampfung
der Probentropfen hat somit keinen Einfluss auf die Enzym-Absorberkonjugate.
Trotz einer Verdampfung der Probentropfen über den langen Zeitraum von mehreren
Stunden wurde auf dem Probenträger auch eine Tröpfchenbildung um die
Proben bei der Luftfeuchte von nahe 100 % r. F. beobachtet. Dies wird in Abbildung
3.23 deutlich, die eine 100 pl Probe nach 30 min bei ca. 100% r. F. zeigt.
100 µm
Abbildung 3.23: Kondensation um eine 100 pl Probe bei ca. 100% r.F. und einer
Klimakammeranfeuchtung ohne Temperaturgradient.
Aus der Abbildung wird ersichtlich, dass die Kondensation keinen Einfluss auf
die Probe hat, wenn man bedenkt, dass das Probenvolumen in der Abbildung
noch ca. 15 mal kleiner als die bestrahlten Probenmengen im Nanoliterbereich
ist. Des weiteren wird ersichtlich, dass das Kondensat keinen Kontakt zur Probe
hat und diese somit nicht verändert.
Für den endgültigen Aufbau wurde die Anreicherung der Luft mit Wasser durch
reine Diffusion gewählt, wobei die Proben und die Probenkammer auf der gleichen
Temperatur bleiben. Dies hat den Vorteil, dass keine Regelung nötig ist,
um die 100 % r. F. einzustellen. Durch eine Verwirbelung der Luft kann die Zeit
bis zum Erreichen ausreichender Luftfeuchte auf 2.5 min begrenzt werden, was
für den Laborgebrauch akzeptabel ist. Ein prinzipielles Problem bei einer aktiven
Verwirbelung besteht in undichten Stellen. Ist in dem System ein Loch, so