Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

iv
3.2 Bestrahlung der Proben . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
3.2.1 Homogenisierung durch Fasern . . . . . . . . . . . . . . . . 65
3.2.2 Raumfrequenzfilterung des
Nanosekundenpuls Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69
3.2.3 Bestrahlung mit einem TEM00 Laser . . . . . . . . . . . . 70
3.2.4 Bestrahlung der Mikroabsorber-Konjugate . . . . . . . . . 75
3.2.5 Bestrahlung der Goldkonjugate . . . . . . . . . . . . . . . 76
3.3 Zusammenfassung der
Bestrahlungsparameter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79
3.4 Aufbau zur Probenherstellung und
Bestrahlung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
3.4.1 Nanoliterproben . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
3.4.2 Optimierter Aufbau zur Handhabung von
Nanoliterproben . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94
3.4.3 Mikroliter-Probenplatten und Druckkammer . . . . . . . . 99
3.5 Herstellung der Enzym-Absorberkonjugate
und Ablauf der Experimente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
3.5.1 Enzymassays . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
3.5.2 Goldkonjugate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 105
3.5.3 Ablauf der Experimente mit Goldkonjugaten . . . . . . . . 110
3.5.4 Mikroabsorber-Konjugate . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111
3.5.5 Ablauf der Experimente mit Mikrometerkonjugaten . . . . 113
3.5.6 Parameterübersicht Enzym-Absorber-Konjugate . . . . . . 114
3.6 Mikroskopische Blasendetektion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114
3.7 Wasserbadexperimente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 116
3.8 Zellexperimente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 116
4 Ergebnisse 121
4.1 Absorber-Fragmentierung und
Blasenbildungsschwelle . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121
4.1.1 Mikrometer-Partikel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121
4.1.2 Gold-Nanoabsorber . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 125
4.2 Sekundentemperatursprünge im Wasserbad . . . . . . . . . . . . . 130
4.2.1 Denaturierungsrate von alkalischer Phosphatase . . . . . . 130
4.2.2 Einfluß der Enzym-Konjugatbindung . . . . . . . . . . . . 132
4.3 Photostabilität der Enzyme . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 134