Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

100 Material und Methoden
in der Druckkammer, wo Temperaturen bis zu 180◦Cfür Mikrosekunden erreicht
werden, ungeeignet.
Zwei Miktrotiterplattentypen aus Glas wurden angefertigt. Der erste Typ hat
Bohrungen mit einem Durchmesser von 2 mm und einer Tiefe von 2 mm. Der
Plattenboden besteht aus poliertem optischen Glas. Die Platten lassen sich durch
Ansprengen eines Deckels abdichten. Der zweite Plattentyp besteht aus Foturan
mit Löchern, deren Durchmesser 1.2 mm beträgt. Der optisch polierte Boden war
wiederum an die Lochplatte gebondet. Beide Platten haben Objekträgerformat.
Die Platten mit 2 mm-Probenbehältern haben ein Volumen von 4 µl und je 18
Probentöpfchen mit 8 mm Abstand von Zentrum zu Zentrum. Die Foturan Platte
hat einen Probenlochabstand von 1.5 mm und 200 Probentöpfchen. Im Fall der
Foturanplatte existierte kein dichtschließender Deckel, so dass die Probenverdunstung
hier die Meßzeit begrenzt. Die größte Schwierigkeit in der Handhabung der
Platten besteht im manuellen blasenfreien Pipettieren von stark proteinhaltigen
Proben, da Blasen zu einer Proteindenaturierung führen [34, 33]. Die Reproduzierbarkeit
bei Messungen der kleinsten Proben in den Foturanplatten ist in
Abbildung 3.34 dargestellt.
Substratfluoreszenz [willk. Einh.]
8
6
4
2
0
0 500 1000 1500 2000 2500
Zeit [s]
Abbildung 3.34: Phosphataseaktivität in 10 manuell pipettierten Proben in einer
Mikrotiterplatte mit einem Probenvolumen von 1.5 µl.
Die Fehler von 40 % sind so hoch, dass eine Messung der Aktivität in jeder einzelnen
Probe vor den Bestrahlungsversuchen nötig ist, oder die Platten nur für
die qualitative Bestimmung von Denaturierungseffekten einsetzbar sind.