Inaktivierung von Proteinen und Zellen durch Laserbestrahlung von ...

Material und Methoden 111
Chymo-Au-Konjugate
Die Chymotrypsin-Gold-Konjugate wurden wie die Phosphatase-Konjugate mit
Nanosekundenpulsen in Tropfen mit einem Durchmesser von 500 µm bestrahlt.
Sie befanden sich ebenfalls in PBS mit einem pH von 7.6. Das Substrat wurde in
einer Konzentration von 10 mM in PBS zugefügt. Das Auslesen erfolgte analog
zu dem der Phosphatase-Konjugate.
Die Bestrahlung der chymo-Au-Konjugate mit Pikosekundenpulsen und hohen
Bestrahlungen und einem Scannen über 64-Felder erfolgte analog zu den Experimenten
mit aP-Au-Konjugaten und ps-Pulsen in den Mikrotiterplatten aus Glas.
3.5.4 Mikroabsorber-Konjugate
Polystyren-Magnetit-Absorber
Als Mikropartikel wurden zum einen magnetithaltige Kunstoffabsorber des Typs
Dynabead Tosylactivated M-280 mit einem Durchmesser von 2.8 µm genutzt, die
im Folgenden als PM-Konjugate bezeichnet werden. Die Partikel bestehen aus einem
zu 12% Magnetit infiltrierten Polystyrenkern, der mit Polyurethan beschichtet
ist. Die Polyurethanstärke beträgt weniger als 100 nm. Die Partikeloberfläche
ist derart modifiziert, dass P-Toluenesulphonyl-Chlorid als Reaktionspartner für
kovalente Bindungen mit Aminogruppen oder mit Sulphydrylgruppen an Proteinen
zur Verfügung steht. Die Konjugation von alkalischer Phosphatase an diese
Absorber wurde nach dem Protokoll von Dynal [50] durchgeführt.
10 µm
a b
10 µm
Abbildung 3.41: Mikroabsorber mit Magnetit als Chromophor: a) Silika-Magnetit
6µm(Sikastar M); b) 2.8µm Polystyrene-Magnetit, Polyurethan (Dynabeads).