UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Resultados
3. ESTUDIO DE LA PARTICIPACION DE LAS NEURONAS CRF DE LA AMÍGDALA EN EL CIRCUITO
NEURONAL QUE SE ACTIVA POR UNO O MULTIPLES EVENTOS DE INGESTA DE DRG
3.1 El ratón transgénico CRF‐hrGFP es un modelo adecuado para estudiar las neuronas CRF de
la amígdala
Con el objetivo de poder estudiar la implicancia que tienen las neuronas CRF de la
amígdala en comportamientos asociados con la recompensa y dado que estas neuronas no
pueden ser detectadas por técnicas de inmunohistoquímica tradicionales, el Dr. Perelló
desarrolló un ratón transgénico que expresa hrGFP bajo el promotor de CRF. Más
específicamente se modificó el BAC de CRF RP24‐80I22, de forma tal que la expresión de hrGFP
está dirigida por los elementos regulatorios del gen de CRF (Figura 20A). Por microscopía de
fluorescencia se confirmó la abundante presencia de células que expresan hrGFP en la amígdala
(De Francesco et al., 2015).
Para determinar si la expresión de hrGFP era limitada a las neuronas CRF, se realizó un
análisis neuroanatómico de la autofluorescencia de hrGFP junto con la señal generada por una
inmunohistoquímica fluorescente roja contra CRF. La fluorescencia de hrGFP fue intensa y se
encontró principalmente en los cuerpos neuronales y también en las dendritas. Como la
visualización inmunohistoquímica de las neuronas productoras de CRF es dificultosa los animales
se pre‐trataron con colchicina intra‐amígdala. Bajo esta condición, la señal de CRF se observó
principalmente en el cuerpo celular y el patrón de fluorescencia de hrGFP no se vio afectado
permitiendo la estimación del grado de colocalización de ambas señales fluorescentes (Figura
20B‐E). Alrededor del 100% de las neuronas dela amígdala inmunoreactivas para CRF expresó
también hrGFP, mientras que el 87 ± 12% de células verdes fluorescentes también presentó
señal roja fluorescente de CRF.
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