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Materiales y Métodos a través de toda la amígdala. La estimación del total de células inmunoreactivas para hrGFP en la amígdala se cuantificó por el precipitado marrón en una de las 4 series de secciones coronales a través de todo el núcleo. Luego estos números se sumaron y se multiplicaron por 4. Los datos se corrigieron por el conteo doble mediante el método de Abercrombie. 6.4 Obtención de imágenes Las imágenes fluorescentes y de campo claro se adquirieron con un microscopio Nikon Eclipse 50i y una cámara digital DS‐Ri1 Nikon. Se utilizaron para la edición, ajuste de brillo y contrastede las imágenes los programas Adobe Photoshop CS4 y Corel Draw 3. Para la cuantificación de la DO se utilizó el programa Image J. 7. ANALISIS ESTADÍSTICO El análisis se realizó con los programas GraphPad Prism 5.0 e IBM SPSS statistics 17. Los datos se expresaron como la media ± SEM. No se encontraron diferencias significativas entre los dos grupos de ratones WT (aquellos provenientes de cruzas entre ratones WT y los hermanos WT de los ratones deficientes de GHSR1a provenientes de cruzas de animales heterocigotas) en ninguna de las mediciones realizadas, por lo que fueron agrupados en el análisis. Para el análisis de más de tres grupos experimentales se utilizó ANOVA de una vía, seguido por el test de Newman‐Keuls cuando las varianzas eran homogéneas; o en caso contrario, por el test de Games‐Howell. El análisis de igualdad de varianzas se realizó mediante los test de Bartlett o Levene. Para comparar los datos provenientes del tratamiento con el antagonista de Ox1 vs los tratados con vehículo en el protocolo de múltiples eventos de ingesta de DRG se utilizó un t‐ Test, con la corrección de Welch cuando los datos no presentaban varianzas iguales. 54
Materiales y Métodos Para comparar los datos provenientes de los experimentos con los ratones WT y deficientes de GHSR1a se utilizó un ANOVA de dos vías seguido por el test de Bonferroni en un único evento de ingesta de DRG y un ANOVA de una vía y t‐Test para comparar los datos de múltiples eventos de ingesta de DRG. La correlación entre las 2 hs de ingesta de alimento y las células inmunoreactivas para c‐ Fos en el IF se realizó por análisis de regresión lineal usando un modelo lineal general. En todos los casos se consideraron diferencias significativas para p
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