UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Materiales y Métodos
1. ANIMALES EXPERIMENTALES
En la presente Tesis Doctoral se utilizaron ratones machos adultos (2‐3 meses de edad)
de tres tipos:
1‐Ratones salvajes (wild type , WT) de la cepa C57BL/6J.
2‐Ratones deficientes de GHSR1a. Se utilizaron animales homocigotas, que se obtuvieron por el
cruzamiento entre animales heterocigotas con una base genética C57BL/6J.
2‐Ratones transgénicos CRF‐hrGFP en los que la proteína verde fluorescente humanizada Renilla
reniformis (hrGFP) se expresa bajo el control del promotor de CRF. Estos animales se generaron
a través del uso de un cromosoma bacteriano artificial de CRF (BAC) que contiene una secuencia
upstream del codón de inicio de CRF de aproximadamente 92,64 kb, la secuencia codificante de
CRF y una secuencia final de aproximadamente 38,16 kb downstream del codón de terminación.
Dentro de éste, se reemplazó la secuencia codificante de CRF por la de hrGFP, en los sitios de
inicio transcripcional de CRF. Finalmente, el BAC modificado se microinyectó en el pronúcleo de
embriones fertilizados en la etapa unicelular de ratones C57BL/6J.
Todos los ratones que se utilizaron se generaron en el bioterio del IMBICE.
Los ratones se mantuvieron en cuartos con ciclos de luz‐oscuridad de 12 y 12 hs (de 7:00
hs a 19:00 hs), a temperatura constante (22 ± 1 °C) con libre acceso a agua y alimento balanceado
comercial para ratón o dieta común (DC), excepto cuando se indique lo contrario. Los diferentes
grupos experimentales se alojaron en jaulas colectivas, con no más de 5 animales por jaula, hasta
3 días antes del experimento correspondiente siendo transferidos en ese momento a jaulas
individuales.
Los animales se sacrificaron de acuerdo a las normas internacionales aceptadas del
“National Institutes of Health” (NIH). Todos los protocolos experimentales fueron aprobados por
36