UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Materiales y Métodos
4.2.2 Evaluación de la acción de ghrelina en eventos diarios de ingesta de DRG
De la misma forma que se realizó para un único evento de ingesta de DRG, se utilizaron 2
estrategias para estudiar si la vía de señalización de ghrelina afecta el consumo diario y por
tiempo limitado de DRG.
−
Utilización de ratones deficientes de GHSR1a: Siguiendo el mismo protocolo de
múltiples eventos de acceso a DRG que se utilizó con el grupo DRG/post día 4, se
utilizaron ratones deficientes del receptor de ghrelina y se les dio acceso a DRG (n=13)
y a DC (n=3) por 4 días, de forma de poder comparar su comportamiento con los ratones
WT del grupo mencionado.
−
Administración periférica de ghrelina: En este experimento la administración de ghrelina
subcutánea (en la misma dosis utilizada anteriormente, 0.2 µg/gr de peso corporal) o
vehículo, se realizó inmediatamente antes de ofrecerles el pellet de DRG. Este protocolo
se repitió durante los 4 días del experimento
Para ambos casos se controló la ingesta durante 2 hs, y el cuarto día los ratones se
perfundieron, se les extrajeron los cerebros y estos se acondicionaron para la realización de
diferentes IHQs.
4.3 ESTUDIO DE LA PARTICIPACION DE LAS NEURONAS CRF DE LA AMÍGDALA EN EL CIRCUITO
NEURONAL QUE SE ACTIVA POR UNO O MÚLTIPLES EVENTOS DIARIOS DE INGESTA DE DRG
4.3.1 Validación del ratón transgénico CRF‐hrGFP
Para la validación del ratón transgénico, se realizó una IHQ, revelada en color rojo, contra
CRF en muestras de cerebro de : (i) ratones naive CRF‐hrGFP (n=3); (ii) ratones CRF‐hrGFP
inyectados intracerebroventricularmente (ICV, coordenadas AP: ‐0,3 mm, L: 1,0 mm and V:‐2,3
mm) con colchicina (32 µg en 4 µl) 72 hs previas al sacrificio (n=3); y (iii) ratones CRF‐hrGFP
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