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Resultados 2.8 La expresión de GHSR1a es necesaria para el desarrollo del perfil ascendente en el consumo de alimento y la activación de la vía mesolímbica inducida por eventos diarios de ingesta de DRG Teniendo en cuenta la relevancia que tiene la ghrelina en la ingesta de alimento se estudió si ésta tiene algún rol en el desarrollo del escalamiento en el consumo de DRG de este modelo experimental. Para realizar esto, se utilizaron ratones deficientes de GHSR1a y a sus hermanos salvajes a los que se les permitió ingerir cada mañana un pellet de DRG por 2 hs durante cuatro días, al igual que lo descripto anteriormente. El cuarto día y luego de ofrecerles acceso a DRG, los animales se perfundieron y sus cerebros se procesaron para la realización de una inmunohistoquímica simple contra c‐Fos y dos dobles: una contra c‐Fos y TH y la otra contra c‐ Fos y orexina. Finalmente, se realizó un análisis cuantitativo de las tinciones realizadas. A diferencia de lo observado para los ratones WT, en los ratones deficientes de GHSR1a no se observó el perfil ascendente en el consumo de DRG a través de los días [F (3,48)= 0,02; p= 0,9948 (Figura 18A)]. Por otro lado, al igual que en los ratones WT, la ingesta de DC en las 22 hs posteriores a los eventos de acceso a DRG permaneció inalterada (Figura 18B). En el análisis cuantitativo realizado del AVT, se observó que los ratones deficientes de GHSR1a presentaron un descenso significativo en el número de células inmunoreactivas para TH y positivas para c‐Fos en las tres subregiones [IF: t (16)= 4,77; p= 0,0002 (Figura 18C); PN: t (16)= 3,38; p= 0,0038 (Figura 18D) y PBP: t (15)= 4,29; p= 0,0006 (Figura 18E)]. Sin embargo, no se observaron diferencias en el número total de neuronas inmunoreactivas para TH entre ratones WT y deficientes de GHSR1a para el IF [t (16)=0,12; p=0,9075], PN ([t (16)=0,16; p=0,8724] y PBP [t (14)=1,21; p=0,2454]. En particular, se encontraron en los animales WT 446 ± 18, 693 ± 36 y 1241 ± 143 neuronas inmunoreactivas para TH en el IF, PN y PBP, respectivamente. Mientras 96
Resultados que para los animales deficientes de GHSR1a se encontraron 442 ± 18, 701 ± 21, 1430 ± 61 neuronas inmunoreactivas para TH en el IF, PN y PBP respectivamente. En las tres subregiones del NAc, el número de células inmunoreactivas para c‐Fos de los animales deficientes de GHSR1a luego de 4 eventos diarios de ingesta de DRG fue significativamente menor que los niveles de c‐Fos encontrados en los animales WT [Caparazón medial: t(14)= 2,73; p= 0,0164 (Figura 18F); Caparazón lateral: t(14)= 3,22; p= 0,0062 (Figura 18G) y Centro: t(14)= 3,43; p= 0,0041 (Figura 18H)]. Po último en el HLat, el número de neuronas inmunoreactivas para orexina y positivas para c‐Fos en los ratones deficientes de GHSR1a fue significativamente menor que el encontrado en los ratones WT luego de 4 eventos de consumo de DRG [76±9 y 272±39, neuronas doblemente marcadas, respectivamente; t (10)= 4,70; p= 0,0008]. Sin embargo, el número total de neuronas inmunoreactivas para orexina no difirió significativamente entre ratones WT y deficientes de GHSR1a [1668 ± 77 vs 1827 ± 136, respectivamente; t (15)= 1,11; p= 0,2838]. 97
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