UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Materiales y Métodos
de DRG similar a la consumida por los ratones tratados con SB‐334867. Se controló la ingesta
total en las 2 hs de exposición a la DRG. Posteriormente los ratones se perfundieron y los
cerebros se acondicionaron para realizar distintas IHQs.
4.1.2 Estudios de trazado neuronal
Para marcar la neuronas del hipotálamo lateral que inervan el AVT, se microinyectaron
estereotáxicamente en ésta zona, fluoesferas como trazador retrógrado (n=6). Las fluoesferas,
son partículas de latex (latex beads) esféricas de 0,04 μm, que se forman a partir del polímero
amorfo poliestireno. Las coordenadas de ubicación que se utilizaron fueron AP ‐3,52, L 0,42, and
V 4,27 mm con respecto al Bregma. Estas coordenadas se obtuvieron inicialmente del Atlas de
Paxinos (Paxinos and Franklin, 2001) y luego fueron modificadas siguiendo los resultados de
estudios pilotos. El inyector (33‐ gauge) se posicionó con un micromanipulador y se inyectaron
800 nl de una suspensión de fluoesferas al 2,5% en salina. Se dejó el inyector en el lugar por 10
minutos de forma de permitir la difusión del trazador. Para permitir el transporte de las
fluoesferas y la recuperación de los animales, se dejaron transcurrir 6 días desde la cirugía.
Durante este tiempo los ratones se alimentaron ad‐lib con DC. En el día experimental, los
ratones inyectados se expusieron a un pellet de DRG por 2 hs y luego se perfundieron, se
extrajeron los cerebros y se acondicionaron para realizar una IHQ doble contra c‐Fos y orexina.
Este experimento se realizó específicamente para evaluar si las neuronas de orexina que se
activan en respuesta al consumo único de DRG (evidenciado por la presencia de señal de c‐Fos)
envían sus proyecciones al AVT, por lo que se excluyó el grupo control con DC.
4.1.3 Experimento de gavage
En este experimento se administró mediante tubos plásticos para gavage oral (cat# FTP‐
20‐38, Instech Solomon Laboratories) DC o DRG resuspendida en agua. El procedimiento de
gavage oral se realizó por personal entrenado siguiendo el protocolo realizado anteriormente
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