UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

Materiales y Métodos
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Tionina (Sigma, cat. T7029).
TritónX.(Biopack)
4. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
4.1 Estudio de los circuitos neuronales involucrados y del rol de ghrelina en el control de un
único evento de ingesta de DRG
En la mañana del día experimental (9.00 am), ratones alimentados ad‐lib con DC se
expusieron a un pellet de DC o DRG por 2 hs (n=16 y 14, respectivamente). Para poder
discriminar los efectos potenciales de la DRG en sí misma de aquellos producidos por la elevada
ingesta de la misma, se incluyó un grupo control pair‐fed que consistió en ratones expuestos a
una cantidad de DRG similar a la consumida por los animales expuestos a DC (n=10). Se controló
la ingesta total en las 2 hs de exposición a las correspondientes dietas. Luego los ratones se
perfundieron, se extrajeron los cerebros y se cortaron en secciones coronales para realizar
distintas inmunohistoquímicas (IHQs)
4.1.1 Bloqueo de la acción de orexina
En otro experimento, se usó el antagonista del receptor Ox1, SB‐334867, para bloquear la
vía de señalización de orexina. Este compuesto se llevó a 100mM en DMSO conteniendo HCl (
en una concentración de 100mM), y se inyectó intraperitonealmente (ip) en una dosis de 5µg/gr
de peso corporal en 200 µl de salina, a las 8:30 am. Se ha observado que dosis similares de SB‐
334867 han afectado el consumo de DRG en varios modelos animales, mientras que no afecta
el consumo de DC disponible. Treinta minutos después de la inyección con vehículo o SB‐334867,
los ratones alimentados ad‐lib con DC, se expusieron a un pellet de DRG por 2 hs (n=10 y 8,
respectivamente). Se incluyó un grupo control pair fed para distinguir los efectos específicos del
SB‐334867 (n=9), que consistió en ratones inyectados con vehículo y expuestos a una cantidad
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