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3. DISENO DE LA INVESTIGACIÓN: MATERIAL Y MÉTODO 3 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN 3.1 Instalaciones, animales y material 3.1.1 Instalaciones La presente investigación se desarrolló íntegramente en el Servicio de Medicina y Cirugía Experimental del Hospital Militar Central Gómez Ulla, concertado como hospital universitario de la Facultad de Medicina de la Universidad Complutense de Madrid. Del Servicio de Anatomía Patológica de este hospital se ha recibido el apoyo necesario para el estudio histopatológico de las piezas anatómicas obtenidas a lo largo del estudio. Fig 3: Conejos Nueva Zelanda utilizados en la experiencia. Animalario del Servicio de Medicina y Cirugía Experimental. Hospital “Gómez Ulla”. Madrid. 3.1.2 Animales Se utilizaron 155 conejos Nueva Zelanda de ambos sexos, procedentes del animalario del mencionado Servicio de Medicina y Cirugía Experimental, con un peso medio de 2896 g (ci = 154; rango 2742-3050 g). En todo momento se observaron las normas de la directiva 86/609 de la Unión Europea sobre alojamientos y cuidados a los animales de experimentación, así como el Real Decreto 223/1988 sobre Protección de Animales de experimentación, que transcribe esta directiva al ordenamiento jurídico 61
nacional. 214 215 3. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN: MATERIAL Y MÉTODO Cuidados y alimentación Los conejos se alojaron enjaulas individuales de acero inoxidable de 0.64 x 0.47 x 0.36 metros, con iluminación natural y artificial y temperatura controlada entre 22 0C y 25 0C. La alimentación empleada durante el ensayo consistió en pienso especial para conejos (Piensos Hersanca), suministrado en tolvas a libre disposición de los animales. El pienso fue controlado para comprobar que su contenido en vitamina. E no superase la cantidad de 100 mg/lOO gr, ya que una cifra superior podria tener un cierto efecto protector contra la acción de los radicales libres producidos durante la fase de isquemia - reperfusion. La ingesta de agua también ad libitum, se realizó por medio de frascos - biberones de 500 ml de capacidad acoplados a las jaulas, renovándose el agua diariamente. La limpieza de estos recintos se realizó diariamente por el personal encargado del animalario, manteniéndose dentro de los estándares del servicio de acuerdo con las buenas prácticas de manejo de animales. 3.1.3 Material empleado Material de anestesia • Caja de contención de metacrilato en forma de U con un sistema de guillotina que cierra un orificio por donde se exterioriza la cabeza del animal quedando inmovilizado y sin riesgo de sufrir lesiones o traumatismos. (fig. 11). • Catéteres Abbocath-T 22G x 19 mm, y jeringuilla de 2 ml para la inducción anestésica por vía intranasal. (fig. 12). • Mascarilla de plástico para acomodarla al hocico del animal y permitir la administración de los gases anestésicos durante el tiempo quirúrgico (fig. 13). • Equipo anestésico con respirador volumétrico tipo Boyle® Internacional (Ohio, E.E.U.U) equipado con toma de gases de oxigeno y protóxido de nitrógeno y vaporizador para isofluorano. Medicación anestésica • Premedicación e inducción: mezcla de ketamina (Ketolar® 50 mg/mí) y xilazina (Rompun® 20 mg/mí), a partes iguales. • Mantenimiento: mezcla de gases oxigeno y Protóxido de nitrógeno, más isofluorano (Forane®) vaporizado. Material quirúrgico • General: guantes, mascarillas, lenceria, batas, paños, apósitos etc., todo ello convenientemente esterilizado mediante autoclave de vapor de agua u óxido de etileno. • Máquina de rasurar (Professional Animal Grooming Model A-S. Oster Divission of Sunbeam Corp. Milwaukee, Wisconsin), para depilar el abdomen del animal • Material de preparación y asepsia del campo quirúrgico: tintura antiséptica a base de povidona yodada (Betadine®). • Caja estándar de laparotomía: pinzas de disección y hemostáticas de diversos tamaños y tipos, tijeras de corte y disección, separador abdominal, portaagujas 62
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