UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID FACULTAD DE ...

3. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN: MATERIAL Y MÉTODO
partir de la cual se realizaron diluciones seriadas 1:1 según la tabla siguiente:
Sol MDA Tampón fosfato pH 7 Concentraciónfinal
MDA
Tubo 1 0,14 ml de sol 70,6 nM 0,86 ml 9,88 ~M
Tubo2 1 mídeltubo 1 1 ml 4,94 t~M
Tubo3 lmldeltubo2 lml 2,47riM
Tubo4 1 mldeltubo3 1 ml l,24~M
TuboS 1 mldeltubo4 1 ml 0,62~M
Tubo6 lmldeltubo5 Imí 0,3l~M
Tubo7 lmldeltubo6 lml 0,l5pM
Tubo 8 1 ml del tubo 7 1 ml 0,077 ~M
Tras haber realizado las diluciones se procedió con cada tubo, de modo similar
al que se realizaría mas tarde con las muestras de intestino siguiendo todo el protocolo
en las mismas condiciones.
La recta patrón de regresión de calculó utilizando concentraciones conocidas
decrecientes de MDA, y enfrentándolas con sus correspondientes densidades ópticas
(absorbancias) obtenidas en el espectrofotómetro para obtener la función general de la
misma: y = a + bx, en la que a = constante y b = pendiente de la recta. Sobre esta recta
patrón, se realizó la recta de regresión, tomando como resultado válido un coeficiente de
regresión R igual o mayor que 0,95, lo que indica que el 95% de los puntos se
encuentran dentro de la correlación lineal, calculando la ordenada en el origen y la
pendiente de la recta, así como el grado de correlación entre los puntos.
3.2.7 Metodología de eutanasia
Todos los animales sometidos a la observación durante las 11 semanas que duró la
experiencia, fueron sacrificados en el caso de que no hubieran fallecido
espontáneamente durante el proceso, mediante sobredosis anestésica con la aplicación
de tiopental sódico intracardiaco, produciéndose la muerte a los pocos instantes y con
ausencia de dolor.
Los animales de las series objeto del estudio de la peroxidación lipídica (test del
TBA), fueron sacrificados intraoperatoriamente por el mismo procedimiento,
inmediatamente después de la obtención de las muestras para su estudio analítico.
3.2.8 Metodología de necropsia
Procedimiento
Se comenzaba seccionando la piel desde el mentón hasta el pubis, observando el
aspecto de la misma y tejido subcutáneo adyacente. Se abrían los músculos rectos del
abdomen, continuando con la incisión por el esternón en la caja torácica. Se observaron
in situ las vísceras abdominales y torácicas así como la arteria mesentérica craneal y las
estructuras próximas a la misma advirtiendo la existencia de adherencias, lesiones,
posibles roturas o coágulos. Se recogió dicha arteria con sus estructuras próximas para
su estudio microscópico, introduciendo la muestra en un tubo de ensayo con formol al
10%.
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