Morfina taldea - Euskara
Morfina taldea - Euskara
Morfina taldea - Euskara
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
72<br />
Doktore-tesia<br />
Metodoak<br />
isoosmotiko batean homogeneizazio batzuen bitartez banatu egiten dira eta zentrifugazio<br />
diferentzialen bitartez nahiko ondo banatzen dira zelula barneko atalak (nukleoak,<br />
mitokondriak, zitoplasma, erretikulu endoplasmikoa,…).<br />
Garunaren kasuan, zatiki mitokondrialean mitokondriaz gain mielina eta nerbio<br />
bukaerak azaltzen dira. Garun ehuna banatzean neuronen axoia nerbio bukaeratik hurbil<br />
apurtu eta itxi egiten da, sinaptosoma izeneko egitura sortuz. Nerbio bukaera hauek<br />
morfologia ezberdineko neuronenak dira. Era berean, beste zatiki zelularrek jatorri<br />
neuronalaz gain gliala ere izan dezakete. Baina arazo hauek aintzat hartu arren, teknika<br />
honek zatiki zelularretan aktibitate entzimatikoaren banaketa zein den nahiko ondo<br />
ezagutarazten digu (Whitaker eta lank., 1969).<br />
Tesi honen helburuetariko bat gizaki eta arratoien garun kortexeko aminopeptidasa<br />
aktibitate ezberdinak zatiki azpizelularretan zeintzuk diren ikertzea izan da. Horretarako<br />
Gray eta Whittakerren metodoa (1962), Krueger eta lankideen aldaketekin (1977), jarraitu<br />
da:<br />
Garun kortexaren 0.3gr 2ml sakarosa disoluzioan homogeneizatu (sakarosa 0.32M eta<br />
Tris-HCl 4mM, pH 7.4 eta 4ºC-tan) 450 rpm-tan eta 30 seg-tan. Lortutako<br />
homogenatutik 100µl geroko tratamendurako bereizi eta beste zatiari 1ml sakarosa<br />
disoluzioa erantsi ondoren 1000 g-tan zentrifugatzen zen 10 minututan zehar.<br />
Sobrenadantea beste hodi batzuetan bereizi eta pellet-a edo hauspeakina 1ml sakarosa<br />
soluzioan homogeneizatuz gero beste 10 minutu zentrifugatzen zen 1000 g-tan. Lortutako<br />
hauspeakina zatiki nuklearrari zegokion eta geroko tratamendurako uzten zen.<br />
Lehengo sobrenadantea eta azkenengoa nahastu eta berriro zentrifugatzen ziren 1000 gtan<br />
10 minututan zehar. Kasu honetan hauspeakina bota eta sobrenadantea 15 minutu<br />
12.500 g-tan zentrifugatzen zen.<br />
Oraingoan sobrenadantea bereizi eta pellet-a 2ml sakarosa soluzioan homogeneizatzen<br />
zen, berriro beste 15 min 12.500 g-tan zentrifugatuz. Lortutako hauspeakinari zatiki<br />
sinaptosomal gordina deritzogu eta bertan mitokondriak, mielina eta sinaptosomak daude.
Change language