Morfina taldea - Euskara

78
2.6. Proteinen neurketa:
Doktore-tesia
Metodoak
Laginetan dagoen proteina kontzentrazioa kalkulatzeko metodoa Coomasie urdin
disdiratsu izeneko koloranteak polipeptidoekiko duen afinitatean oinarritzen da (Bradford,
1976). Teknika kolorimetrikoa da, hau da, zenbait konposatu kimikok argia zurgatzeko
duten gaitasunean oinarritzen da.
Kolorantea proteinekin lotu eta gai kimiko horren zurgapenaren uhin luzeran aldaketa
bat gertatzen da, 465 nm-tik 595 nm-tara pasaz. Zurgapen gehikuntza, kolorantea
saturantea izanik, proteina kontzentrazioarekiko zuzenki proportzionala da. Honela,
absortzioaren gehikuntza espektrofotometro edo kolorimetro batean neurtuz proteina
kantitate ezagunekin egindako zurgapen patroi-zuzen batean interpola daiteke.
Gure esperimentuetan 10 ml lagin 2 ml Bradford erreaktiborekin inkubatu (5 min) eta
sahodi bakoitzeren edukinaren absorbantzia fotometroan neurtzen genuen, absortzioaren
uhin-luzera kontrolatzen duen monomarkadorea 595 nm-tan finkatuz.
Patroi-zuzena egiteko, behi-seroalbuminaz prestatutako kontzentrazio jakineko
alikuotaren µl ezberdinak jarri eta bakoitza Bradford erreaktiboaren 2ml-rekin inkubatzen
genituen. Lortutako absorbantziaren emaitzak, kontzentrazioarekiko proportzionaltasun
zuzena azaltzen duen Y= aX + b funtzio zuzen batera doitzen direla ikusi eta zuzen
horretan gure laginekin lortutako absorbantzia balioak interpolatzen genituen.
2.7. Metodo estatistikoa
Tesi honetan, egindako neurketa eta planteatutako talde moten arabera metodo
estatistiko ezberdinak erabili dira konparaketen esangarritasuna jakiteko: