Enzkin - Elm-Asse-Kultur

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Daten
gesteigerte Glykogenkonzentration im Muskel führt zu Muskelleiden nach Anstrengung und zu
hämolytischen Symptomen.
Leber: Ein Vergleich mit dem Muskelenzym ergibt Unterschiede im regulatorischen Verhalten
hinsichtlich ATP, (stärkere Inhibition), Citrat, PEP, Creatin-P, 2-PG, 3-PG (geringere Inhibition) sowie
AMP und ADP (geringere De-inhibition). Die spezifische Aktivität beträgt 1/50 des obigen; vergl. J.
Biol. Chem. 246, 245 (1971).
3.3 Glycerinaldehyd-3-Phosphat-Dehydrogenase (GAPDH, EC 1.2.1.12),
Enzym des Schrittes 5
M. Lazdunski Curr. Top. Cell. Reg. 5, 268 (1972), Worthington Enzyme Manual
Prinzip: Die Vorwärtsreaktion der GAPDH beinhaltet drei Substrate (GAP, NAD + ,
P i ). Die oxidative Phosphorylierung von GAP erfolgt in zwei Schritten. Im ersten
Schritt reagiert der Aldehyd mit dem Cystein des aktiven Zentrums zum
Hemithioacetal, welches zum Thioester-Intermediat oxidiert wird. Im zweiten Schritt
wird das 3-Phosphoglycerol-Enzym phosphorolytisch zum BPG gespalten.
Das Enzym liefert klassische "steady-state"-Kinetiken mit allen Substraten
(einschließlich beider Oxidationsstufen des Coenzyms), jedoch sind die aktiven
Zentren nicht unabhängig voneinander: sowohl NAD + als auch NADH,H + zeigen bei
ihrer Bindung negative Kooperativität (Bode et al. 1975, Biochemistry 14, 1146). Wie auf Grund
der tetrameren Struktur zu erwarten, bindet das Enzym vier Moleküle des
Coenzyms, jedoch sind deren Bindungskonstanten weit voneinander verschieden.
Die ersten beiden Moleküle werden so fest gebunden, dass ihre Dissoziationskonstante
durch herkömmliche Verfahren nicht zu bestimmen ist, die folgenden
beiden Moleküle zeigen geringere Affinitäten (d.h. höhere Dissoziationskonstanten).