Enzkin - Elm-Asse-Kultur
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95<br />
Tricks<br />
Abb. 8.14; A: Substratumsatz von Pyruvat durch LDH bei drei nicht-sättigenden Konzentrationen von<br />
NADH,H + (A 3 >A 2 >A 1 ). Im Lineweaver-Burk Diagramm entsteht scheinbar das Muster einer<br />
nichtkompetitiven Inhibition. Schnittpunkt der Linienlinks der 1/v Achse ist typisch für einen<br />
sequenziellen Mechanismus (8.14.1; beim Ping-Pong Mechanismus (8.14.2) entstände, analog der<br />
unkompetitiven Inhibition, eine Schar paralleler Geraden [Voet & Voet, S. 364]). B; sekundärer Plot<br />
der ínterceptsáus Teil A zur Bestimmung des K m -Wertes für das zweite Substrat (NADH,H + ); im<br />
Gegensatz zu den Sekundärdiagrammen der Hemm-Mechanismen, wo direkt gegen [I] aufgetragen<br />
wird (Abb. 8.11) ist hier die Steigung genen 1/[B] aufzutragen.<br />
(Bisswanger "Enzymkinetik 1979, S. 118; Zeichnung nach Tabelle 2.1 in: Bisswanger „Enzymkinetik“<br />
(1994), p137<br />
8.14.1 Sequenzieller Mechanismus: geordnet oder willkürlich<br />
W. W. Cleland, Biochim.Biophys.Acta 67, 104-137 (1963); Meth. Enzymol. 63, 1-65 (1975).<br />
Nur der sequenzielle bi-bi Mechanismus, nicht aber uni-bi- oder uni-uni<br />
Reaktionen weisen Aspekte der nichtkompetitiven Hemmung auf. Das in Abb. 8.14<br />
gezeigte Muster des Lineweaver-Burk Diagramms gilt unabhängig davon, ob die<br />
Substrate/Produkte in einer obligatorisch festgelegten, „geordneten“ Reihenfolge<br />
gebunden/freigesetzt werden (́´obligatory order´́) oder ob deren Reihenfolge<br />
willkürlich ist ('random'). Die Entscheidung zwischen diesen Grenzsituationen lässt<br />
sich dann fällen, wenn man Kinetiken von vorn herein in Gegenwart eines der<br />
Podukte durchführt, das die Kinetik als Produktinhibitor beeinflusst.<br />
Eigentlich sollte man erwarten, dass ein Produkt den Umsatz des Substrates aus dem es<br />
entstanden ist, in kompetitiver Weise (c) hemmt. Gegenüber dem Cosubstrat sollte es<br />
nichtkompetitiv (nc) wirken, da es Anteile des Substrates verdrängt und somit maximale<br />
Reaktionsgeschwindigkeit nicht zulässt. Tatsächlich hängt das Resultat jedoch von dem<br />
zugrundeliegenden Mechanismus ( ´obligatory/random order´ ́) ab. Diesen Umstand nutzt<br />
man zur Aufklärung des Reaktionsmechanismus, denn es gilt:
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