Enzkin - Elm-Asse-Kultur

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Km/Ki
9.7 Dixon-Auftragung zur direkten Ablesung von K i -Werten
Literatur: M. Dixon und E.C. Webb "Enzymes", Academic Press 1964, pp 328
Der nachfolgend vorgestellte "Dixon-Plot" erlaubt eine graphische Mittelwertsbildung
von Schnittpunkten aus verschiedenen Messreihen; K i ist durch den
mittleren Abszissenwert dieser Punkte definiert während Kis auf diesem
Wege grundsätzlich nicht ermittelt werden kann. 28
Man bestimmt die Geschwindigkeit bei verschiedenen Substrat- und Inhibitorkonzentrationen.
Im Diagramm von 1/v vs. I erhält man dann Geraden, die sich
bei - K i schneiden (Abb. a) und b)).
Falls ein V max -Wert für die Reaktion bereits bestimmt wurde, ist es im kompetitiven Fall nur nötig,
Messungen bei einer Substratkonzentration durchzuführen, denn der Punkt, der K i definiert liegt dann
auf der Höhe 1/V max (Abb. c).
Abb. 8.12: Graphische Bestimmung von Inhibitionskonstanten nach Dixon ("Dixon Plot")
Der Vollständigkeit halber sei erwähnt, dass Dixon später einen erweiterten Plot entwickelt hat, der
einige fragliche Annahmen eliminiert (Biochem. J. 129, 197, 1972): "The principle of Dixon (1965) has
been extended to give rapid graphical methods for determining ... K m and K i . It does away with the sometimes
questionable assumption that the amounts of substrate or inhibitor bound by the enzyme are negligible in
comparison with the total amount added, and is therefore valid even for cases of high affinity where the usual
methods fail. Besides doing away with the need for calculation, it enables the concentrations of the various
components of the system to be read off directly for any point of the velocity curve."
Das Programm Composit bietet unter der Option [I]nhibitors, [C]oncentration [E o ] =
[I o ] eine andere Lösung dieser Problematik und stellt den "Easson-Stedman-plot"
vor. 29
28 Da der Dixon plot die weiteste Verbreitung gefunden hat, haben wir seine Beschreibung im Skript
belassen; eine Demonstration seiner Eigenschaften und Grenzen ist Teil des MMenten-Programms
unter den Optionen [I]nhibitors, [R]eversible. Ansonsten empfehlen wir ihn für Praktikumszwecke nicht
mehr.
29 L. H. Easson & E. Stedman (1936), Proc. Roy. Soc. B 121, 141-164; J. Bieth (1984), Biochem.
Med. 32 387-397. Die Situation [E o ] = ca. [I] ist typisch für das System aus Protease und -Inhibitor,
welches nicht auf klassischem Wege behandelt werden kann.