Enzkin - Elm-Asse-Kultur

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Metaboliten
6. BESTIMMUNG VON METABOLITENKONZENTRATIONEN IN
BIOLOGISCHEN FLÜSSIGKEITEN
• NACH DER ENDPUNKTMETHODE:
6.1 Das Messprinzip
Bei der Konzentrationsbestimmung von Substraten und Coenzymen misst man im
allgemeinen nach der Endwert-Methode den gesamten Umsatz. Verläuft - was
experimentell immer angestrebt wird - die Reaktion gemäß günstiger Gleichgewichtslage
quantitativ, so ist das Anlegen von Bezugskurven überflüssig. Um die
Reaktion möglichst zu beschleunigen, arbeitet man mit relativ hohen Enzymkonzentrationen.
Gelegentlich kommt die Reaktion nicht vollständig zum Stillstand. Man
beobachtet vielmehr eine langsame, kontinuierliche Extinktionsveränderung
("Schleich-Reaktion"). Diese Extinktionsveränderung überlagert sich der gesamten
Reaktion, so dass graphisch auf die Zeit des Starts (t o ) zu extrapolieren ist. Zur
Extrapolation wartet man, bis die Reaktionsrate über 4 - 5 Min konstant bleibt, dann
verlängert man den linearen Teil der Kurve bis zur Zeit t o . Aus den Schnittpunkten mit
der Ordinate erhält man dann die wahre Extinktionsänderung, die man der
Berechnung zugrunde legt:
Abb. 6.1: Berücksichtigung einer "Schleichreaktion"
6.2 C1: Versuche am Kaninchenmuskel-Extrakt