Enzkin - Elm-Asse-Kultur

INHALTSVERZEICHNIS
1. ALLGEMEINE ARBEITSHINWEISE UND INFORMATIONEN
1.1 Einige Abkürzungen und Definitionen 8
1.2 Methoden zur Bestimmung des Proteingehaltes 10
1.2.1 UV-Methode am Beispiel der GAPDH
1.2.2 Biuret-Methode 10
1.2.3 Methode nach Lowry 11
1.2.3.1 Bicinchoninsäure (BCA-) Variante 12
1.2.4 Fluram- (Fluorescamin-) Methode 13
1.2.5 Bradford-Test 14
1.2.6 Zur Präzision wichtiger Proteinbestimmungs-Verfahren 16
2. METABOLISCHE UND ENZYMOLOGISCHE GRUNDLAGEN
2.1 Schwerpunkt dieses Praktikums: Glycolyse-Enzyme 17
2.2 Stellung der Glycolyse im Energiestoffwechsel 18
2.3 Coenzyme der Dehydrogenasen (GAPDH; GDH; LDH):
NAD + und NADH,H + 19
2.4 Prinzip des Aktivitätstests für NAD + abhängige 20
Dehydrogenasen: der optische Test
3. CHEMISCHE UND PHYSIKALISCHE DATEN
3.1 für NAD + und NADH (molare Extinktionskoeffizienten) 21
3.2 für Phosphofructokinase (PFK) 21
3.4 für GAPDH 23
3.5 für Pyruvatkinase 24
3.5 für LDH 25
4 AKTIVITÄTSTESTS :GLYCOLYSEENZYME IN GEWEBEEXTRAKTEN
4.1 Einleitung zu den Versuchen Versuche A 26
4.2 Präparation des Muskelextraktes (A0) 28
4.3 Aktivitätstests für Lactat-Dehydrogenase 28
4.3.1 "Vorwärtsreaktion" (A1.1)
4.3.2 "Rückwärtsreaktion" (A1.2) 29
4.4 Kombinierter Test für PGK und GAPDH
(Rückwärtstest) (A2) 30
4.5 Kombinierter Test für Aldolase und GAPDH (A3) 31
4.6 Aktivitätstest für Aldolase (Hydrazonbildung) (A4) 31
4.7 Kombinierter Test für Aldolase und Triosephosphat-
Isomerase (A5) 32
4.8 Aktivitätstest für Triosephosphat-Isomerase (A6) 32
4.9 Die "Vorwärtsreaktion" der GAPDH
4.9.1 Darstellung des GAPDH-Substrates (GAP) (A7.1) 33
4.9.2 Standardisierung der GAP-Lösung (A7.2) 33
4.9.3 Aktivitätstest für GAPDH (A7.3) 34
4.10 Rechenbeispiel zu Aktivitätsbestimmungen:
Volumenaktivität und spezifische Aktivität 35
5. ZUR FREIEN STANDARDENTHALPIE (∆G o ) UND FREIEN ENTHALPIE (∆G)
CHEMISCHER REAKTIONEN
5.1 Einleitung zu den Versuchen Versuche B 37
5.2 Freie Standardenthalpien der Glycolysereaktionen 38