Enzkin - Elm-Asse-Kultur

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Km/Ki
8.6 Parametervergleich: Bindungsmessungen und Enzymkinetik
8.7
Messung im thermodynamischen kinetische Messung
Gleichgewicht (Bindungsmessung) (Enzymkinetik)
r, Zahl besetzter Bindungsplätze v, Umsatzgeschwindigkeit
n, Zahl vorhandener Bindungsplätze V max , maximale Umsatzgeschwindigkeit
K d , Dissoziationskonstante [mol/l] K m , Michaeliskonstante [mol/l]
L, Konzentration an freiem Liganden S, Substratkonzentration
Mit diesen Konversionen lassen sich alle Gleichungen/Auftragungen der
Enzymkinetik für Protein Ligandenwechselwirkungen einsetzen und vice versa.
8.7 Zur Auswertung emzymkinetischer Daten: Merkmale verschiedener Plots
Hans Bisswanger, "Theorie und Methoden der Enzymkinetik", Verlag Chemie (1979
8.7.1 Computergestützte Analyse
Die Bestimmung der Parameter K m (K d ) und V max (n) aus hyperbolischen Sättigungsfunktionen
erfolgt heute zweckmäßigerweise mit Computerunterstützung, d.h. durch
nichtlineare Regressionsanalyse. Eine einfache Analyse dieses Typs findet sich in
den Programmen "KmVm" und "MMenten"; sich überlagernde Hyperbeln können
durch das höherentwickelte Programm "Composit" analysiert werden.
8.7.2 Bedeutung konventioneller Auftragungen
Zur Datenrepräsentation und für eine vorläufige graphische Analyse eignen sich
lineare Transformationen der Michaelis-Menten Beziehung, wie sie unter 8.4
abgeleitet wurden. Aufgrund unvermeidbarer Messfehler beinhalten alle diese
graphischen Verfahren bei der Auswertung einiges an Subjektivität, was man sich
am besten mit Hilfe der Graphikprogramme "Enzpack" oder "MMenten" 23
veranschaulicht. Dort und bei Inspektion der Abbildung 8.6-a wird man folgendes
feststellen:
23 Abbildung 8.4 (umseitig): Möglichkeiten der Datentransformation und Datenausgabe im
Programm "MMenten". Das Diagramm "V vs. S plot" zeigt die Messdaten (bei gleichbleibenden
Konzentrationsunterschieden auf der S-Achse); die weiteren Diagramme zeigen Transformationen für
diese Messpunkte, wie sie z.B. unter 'files' im Programmpaket beschrieben werden.