Enzkin - Elm-Asse-Kultur

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Km/Ki
Abb. 7.3: Muskelextrakt wird durch Zugabe von NADH,H + und GDH als Hilfsenzym an ATP, 3-PG und DAP
depletiert. Ausbleiben einer weiteren Reaktion nach F-6P Zugabe zeigt Abwesenheit von ATP. Die PFK-
Reaktion kann dann durch Zugabe von ATP gestartet werden.
Fertigen Sie Diagramme an, in denen Sie die Endkonzentrationen an ATP (mM, Abszisse)
gegen die höchste Reaktionsgeschwindigkeit (∆E/min) auftragen.
- zur Abschätzung des K m -Wertes für ATP verwenden Sie statt 2) bitte ATP-
Lösungen von ca. 5 mM.
Damit können Sie den Bereich erfassen, in welchem Erhöhung der ATP-Konzentration Steigerung der
Umsatzgeschwindigkeit bewirkt
- Ermitteln Sie die präzisen K m und K is- Werte für ATP mit Hilfe des Programmes
Composit
(Option [I]nhibition; [S]ubstratinhibition;
- geben Sie mögliche Gründe an für die "lagphase" zu Beginn der Reaktion;
B) Einfluss von Citrat (3) 19 :
Testm.(1) 2495 2475 2445 2395 2295
GDH 5µl 5µl 5µl 5µl 5µl
Glycolyt. Lösung 100 100 100 100 100
Citrat (3) - 20 50 100 200
NADH,H + (5) 150 150 150 150 150
F-6P (4) 100 100 100 100 100
- Warten: F-6P-Depletion; NADH,H + ausreichend? -
ATP (2) 150 150 150 150 150
Fertigen Sie Diagramme an, in denen Sie die Endkonzentrationen an Citrat (mM, Abszisse)
gegen die höchste Reaktionsgeschwindigkeit (∆E/min) auftragen.
- Schätzen Sie den K i -Wert für Citrat;
19 Die Citrathemmung tritt nur vor dem Hintergrund einer erhöhten (bereits inhibitorischen) ATP-Konzentration
(8 mM) auf: A. Parmeggiani & R. H. Bowman (1963), Biochem. Biophys. Res. Commun. 12, 268-273, Tab. 1