Enzkin - Elm-Asse-Kultur

75
Km/Ki
8.8 Soforttest für Messwerte: die direkt-lineare Auftragung
R. Eisenthal und A. Cornish-Bowden (1974) Biochem. J. 139, 715-720
A. Cornish-Bowden und R. Eisenthal (1974) Biochem. J. 139, 721-730
F. de Miguel Merino (1974) Biochem J. 143, 93-95
A. Cornish-Bowden (1975) 149, 305-312
A. C. Storer, M. G. Darlison und A. Cornish-Bowden (1975) Biochem. J. 151, 361-367
M. Markus, B. Hess, J. H. Ottaway und A. Cornish-Bowden (1976) FEBS Lett. 63, 225-230
A. Cornish-Bowden und R. Eisenthal (1978), Biochim. Biophys. Acta 523 268-272
http://de.wikipedia.org/wiki/Enzymkinetik
Für die Ermittlung von K m -Werten bzw. Inhibitionsmustern ist es essentiell, jede
gemessene Anfangssteigung sofort (!!!) auf ihr Zutreffen zu überprüfen. Als Vortest
kann das Einzeichnen in ein v vs. S-Diagramm uneingeschränkt empfohlen werden.
Die S-Werte sind vor Versuchsbeginn bekannt (eingestellte Substratkonzentrationen!),
während der Versuchsreihe ist dann nur der Ordinatenwert für v (bzw. die
Anfangssteigung in beliebigen Einheiten) nachzutragen. Im Gegensatz zu normalen
Auftragungen werden die Messwerte also nicht als Punkte dargestellt, sondern in
Form von Linien, die sich im günstigsten Fall in einem gemeinsamen Punkt
schneiden. Der Demonstration im Programm "Enzpack" (Option E) können Sie entnehmen,
dass sich dies aus der Geometrie
der klassischen Hyperbel ergibt.
Abb. 8.7: Beziehungen zwischen einer Hyperbel und
ihren Asymptoten.
For a rectangular hyperbola through the origin, given by
v=V max . [S]/K m +[S], the asymptotes are [S]=-K m and v=V max ,
and they intersect at the point (-K m , Vmax) in the second
quadrant. Any line through this point intersects at the [S] and
v axes at points [S i ], 0 and 0, v i that correspond to a point
([S i ], v i ) on the hyperbola.' Darstellung nach F. de Miguel
Merino; nach Cornish-Bowden befindet sich die Hyperbel im
zweiten, die Schnittpunkte im ersten Quadranten.
Im direkt-linearen Plot wird die Fehlerbehandlung
weitgehend vereinfacht: die Linien im zweiten
Quadranten werden mehr oder weniger um einen
Punkt
streuen. Mittelwertsbildung gibt dann die
wahrscheinlichen Werte für die Parameter K m und
V max . Bei Inspektion der Streubreite der Messpunkte
(nicht identisch mit deren Standardabweichung!)
können Ausreißer leicht identifiziert und sog. "medians" 24 abgelesen werden; dies erledigen auch die
Programme "Enzpack" und MMenten".
24 'median': derjenige Messpunkt, zu dessen rechter bzw. linker Seite sich die gleiche Anzahl
weiterer Messpunkte befindet. 'Medians' statt 'means' (Mittelwerten) sind stets zu bevorzugen, wenn
die Fehlerverteilung unsymmetrisch ist; 'Ausreißer' beeinflussen das Ergebnis dann nicht. Existiert
eine gerade Zahl an Messpunkten (bzw. Schnittpunkten im direkt-linearen Diagramm), so gibt es
zwangsläufig zwei 'medians'.