Enzkin - Elm-Asse-Kultur

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Aktivitätstests
spez. Akt.
S: Konzentrationen an NAD + bzw. GAP.
= v . (1 + K m /S) NAD+ × (1 + K m /S) GAP
4.10 Rechenbeispiel zu Aktivitätsbestimmungen: Volumenaktivität und
spezifische Aktivität
4.10.1 Definitionen
Derzeit gibt es zwei Systeme zur Benennung von Enzymaktivitäten:
- Die 1961 eingeführte "enzyme unit", definiert als diejenige Enzymmenge, die
unter Standardbedingungen je min ein µmol Substrat umsetzt (dies ist die hier
verwendete Definition. Es gibt Anzeichen dafür, dass sie sich bei Enzymologen
halten wird).
- Die 1972 definierte SI-Einheit "katal" (Symbol "kat"), das ist die Enzymaktivität,
ausgedrückt als mol umgesetztes Substrat je sec.
Die beiden Systeme sind folgendermaßen miteinander gekoppelt:
1 kat = 6 × 10 7 enzyme units
1 enzyme unit = 16.67 × 10 -9 kat
= 16.67 nkat.
4.10.2 Rechnung
Aus dem Lambert-Beerschen Gesetz
E = ε × c × d
folgt für 1 cm-Küvetten (d = 1)
E/ε = c
d.h. aus der Extinktion E einer Substanz und über den Proportionalitätsfaktor ε
(molarer Extinktionskoeffizient) lässt sich ihre molare Konzentration ermitteln. (Einheit:
mol/l / mmol/ml).
Analog lässt sich aus einer Kinetik, d.h. der Extinktionsänderung ∆E, der
Substratumschlag ∆S während eines Zeitintervalls bestimmen:
∆E/ε = ∆c
NADH,H + hat einen molaren Extinktionskoeffizienten ε 340 = 6300. Bildung von 1
mol/l (1 mmol/ml) wäre also mit einer Änderung der Extinktion, ∆E 340 = 6300
verbunden. Angenommen, bei einem Aktivitätstest findet man eine Änderung der
∆E 340 = 1,8 je min, so entspricht dies:
1.8/6300 = 2.86 x 10 -4 mmol/(ml . min)
d.h., einer Volumenaktivität von 0.286 µmol/(ml . min) oder (gebräuchlicher) 0.286
enzyme units pro ml Lösung in der Küvette. Die Aktivität im Ausgangsextrakt ergibt
sich dann durch Multiplikation mit dem Verdünnungsfaktor (30 für einen Prototyp-