m i t Escherichia coli - Forschungszentrum Jülich

A Anhang
pH-Wert dieses gepufferten Mediums war 7,2. Das Medium wurde in eine autoklavierte
Vorratsflasche sterilfiltriert und bei 4 ◦ C gelagert.
Hauptkulturmedium
MgSO4*7 H2O 3,0 g/l
CaCl2*2 H2O 0,015 g/l
KH2PO4
3,0 g/l
NaCl 1,0 g/l
(NH4)2SO4
5,0 g/l
FeSO4*7 H2O/Na-Citrat 0,1125/1,5 g/l
Spurenelementelösung 1,5 ml/l
Vitamin B1 (Thiamin * HCl) 0,075 g/l
L-Tyrosin 0,3 g/l
Glucose 15,0 g/l
Ampicillin 0,1 g/l
Die Stammlösungen der Bestandteile wurden in bidestilliertes Wasser gegeben, so dass die
angegebenen Endkonzentrationen nach Inokulation mit 10 % Vorkultur erreicht wurden.
Vitamin B1 und L-Tyrosin wurden in fester Form zugegeben. Um das L-Tyrosin zu lösen,
wurde das Medium vier Stunden gerührt. Der pH-Wert des Mediums war 5,2. Das Medium
wurde vor der Fermentation durch ein Mikrofiltrationsmodul (0,2 µm) in den zuvor
autoklavierten Bioreaktor sterilfiltriert. Der pH-Wert wurde über die pH-Regelung des
Bioreaktors auf 6,5 eingestellt. Ampicillin wurde erst kurz vor dem Start der Fermentation
über einen 0,2 µm Einweg-Sterilfilter in den Bioreaktor gegeben.
Das Medium für die Fermentationen im Sixfors Vario unterschied sich in der Menge der
Spurenelemente (1 ml/l), in der L-Tyrosin-Konzentration (0,25 g/l) und in der Glucosekonzentration
(13,64 g/l).
Zulaufmedien Glucose und Tyrosin
Glucose 700 g/l
L-Tyrosin 25 g/l
Die Glucose wurde in bidestilliertem Wasser angesetzt und 20 Min. bei 121 ◦ C autoklaviert.
L-Tyrosin wurde in 5 % (NH4)OH-Lösung gelöst. Die Lösung war autosteril.
IPTG-Lösung
Die IPTG-Lösung wurde in bidestilliertem Wasser mit einer Konzentration von 200 mM
angesetzt und bei -20 ◦ C gelagert. Zur Induktion wurde eine der gewünschten Endkonzentration
der Lösung entsprechende Menge über einen 0,2 µm Einweg-Sterilfilter in den
Bioreaktor gespritzt.
pH-Korrekturmittel und Antischaum
Zur Einstellung des pH-Wertes im Bioreaktor wurde autosterile 25 % (NH4)OH-Lösung
verwendet.
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