Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

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Índice temático RESUMEN……………………………………………………………………………..1 SUMMARY……………………………………………………………………………..3 ANTECEDENTES……………………………………………………………………..5 1. Establecimiento del territorio neural de Xenopus laevis…………………..5 1.1 Inducción Neural……………………………………………………………….5 1.2 El modelo por defecto. ………………………………………………………..6 1.3 Inductores neurales y vías de señalización que participan en la inducción neural……………………………………………………………………………8 2. Especificación del borde de la placa neural e inducción de las crestas neurales………………………………………………………………………..13 2.1 Posicionamiento del borde de la placa neural……………………………..13 2.2 Inducción de las crestas neurales…………………………………………..13 3 Neurogénesis embrionaria de Xenopus laevis…………………………….17 3.1 Genes que conectan la inducción neural con la neurogenesis………….17 3.2 Neurogénesis primaria en Xenopus laevis…………………………………18 3.2.1 Determinación y diferenciación neuronal en Drosophila, genes proneurales……………………………………………………………………18 3.2.2 Selección de progenitores neurales, genes neurogénicos y el mecanismo de inhibición lateral…………………………………………………………...19 3.2.3 Determinación y diferenciación neuronal en Xenopus, genes proneurales y neurogénicos………………………………………………………………..20 3.3 Posicionamiento de los cluster proneurales, genes del prepatrón……...22 3.3.1 Establecimiento de los dominios neurogénicos en Xenopus laevis…….23 3.4 Factores que modulan la actividad proneural de las proteínas bHLH….26 4. REST/NRSF y la regulación de la expresión de los genes neuronales que codifican para proteínas estructurales……………………………………..27 4.1 Estructura función de REST/NRSF………………………………………...28 4.2 Mecanismos moleculares de represión y silenciamiento génico………..29 4.2.1 Mecanismo de inhibición de la transcripción en células no-neuronales..29 4.2.2 Mecanismo de regulación en células troncales embrionarias…………..31 4.2.3 REST/NRSF y el estado de la cromatina desde progenitores neurales a las neuronas diferenciadas………………………………………………….33 4.2.4 Función de REST/NRSF en neuronas diferenciadas…………………….36 4.3 Estudios de la función de REST/NRSF in vivo……………………………37 4.3.1 Estudios de promotores de genes neuronales estructurales usando animales transgénicos……………………………………………………….37 4.3.2 Estudios de pérdida y ganancia de función de REST/NRSF durante el desarrollo embrionario……………………………………………………………….39
Hipótesis……………………………………………………………………………….43 Objetivo general………………………………………………………………………43 Objetivos específicos…………………………………………………………………43 MATERIALES Y MÉTODOS………………………………………………………...45 Materiales……………………………………………………………………………...45 Animales……………………………………………………………………………….45 Reactivos para la obtención y mantención de embriones y explantes animales ………………………………………………………………………………………….45 Cultivo Celular………………………………………………………………………...45 Registros electrofisiológicos…………………………………………………………46 Biología Molecular…………………………………………………………………….46 Síntesis de ribosondas y mRNA…………………………………………………….46 Hibridación in situ……………………………………………………………………..47 Sistemas Comerciales…………………………………………………………………………...49 Enzimas………………………………………………………………………………..49 Otros reactivos usados en biología molecular…………………………………….49 Cepas Bacterianas……………………………………………………………………………50 Medios de cultivo Bacteriano………………………………………………………..50 Métodos………………………………………………………………………………..51 Animales……………………………………………………………………………….51 Obtención de embriones de Xenopus laevis mediante fertilización in vitro…….51 Microinyección de embriones e inducción con dexametasona………………….51 Recolección de embriones. …………………………………………………………54 Explantes animales. ………………………………………………………………….54 Cultivo celular. ………………………………………………………………………..54 Registros electrofisiológicos. ………………………………………………………..55 Técnicas de Biología Molecular. …………………………………………………...56 Aislamiento del cDNA de XREST/NRSF y zREST/NRSF y generación de construcciones para la sobreexpresión…………………………………………….56 Analisis de PCR semicuantitativo (SQ-PCR) en explantes animales…………..57 Inmunodetección de histona H3 fosforilada………………………………………..57 Transcripción in vitro de mRNA……………………………………………………..58 Síntesis de ribosondas para hibridación in situ……………………………………60 Hibridación in situ (ISH)……………………………………………………………...62
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